Banque d'ADN

[Perxyd]

Bonjour,

Pour effectuer une banque d'ADNg d'un organisme, si j'ai bien compris, il suffit de mettre l'ADNg en présence d'une enzyme de restriction et de vecteurs. Nous nous retrouvons alors avec un ensemble de plasmides contenant chacun un fragment d'ADN.

Mais alors, comment extraire un gène d'intérêt de cette banque, sachant que ce gène a sans doute été découpé en morceaux par l'enzyme de restriction et cloné dans différents plasmides ? Et lorsque nous l'avons extrait, comment "l'assembler" de nouveau de manière à obtenir la séquence initiale ?
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[Tibosax]

Les banques d'ADNg ne permettent pas d'isoler de gènes en particulier, mais plutôt des fragments d'ADN, qu'on doit par la suite cribler.

Pour faire des banques de gènes, il faut passer par une banque d'ADNc (extraction d'ARN puis Retro Transcription). Cette technique a par contre le désavantage de sur-représenter les gènes très exprimés dans la banque, et de posséder seulement certains patterns d'épissages (en particulier les patterns cellule-spécifiques).

[Perxyd]

Merci pour la réponse !
Je pense que c'est justement le criblage que je ne comprends pas.

Imaginons que je souhaite savoir si l'organisme possède un gène X, comment le repérer dans la banque ?

Par exemple, nous avons l'ADN en entier : ------- AATTGGCCAATTGGCCAATTGGCCAATTGG CC -------

Suite à la digestion par l'enzyme de restriction, nous obtenons ces fragments :

------- AA / TTGGCCAATT / GGCCAATTGGCCAATTG / GCC -------

Nous clonons ensuite ces fragments dans des plasmides.

Maintenant, pour savoir si le gène X est présent dans cette banque et j'utilise une sonde ADN complémentaire au gène. Or, elle ne s'hybridera pas dans cette banque car le gène n'est présent que sous la forme de fragments...

[Flyingbike]

une sonde peut s'hybrider sur un fragment... Meme partiellement.

Et n'oublions pas qu'une bonne banque se doit d'être un minimum redondante, et que la taille des fragments n'est pas choisie au hasard en fonction de ce qu'on veut en faire!

[A voir en vidéo sur Futura]

[Perxyd]

Merci beaucoup !