culture cellulaire primaire

[invited45a2e6f]

Bonjour,

Je recherche un protocole avec les grandes lignes expliquant cette technique. merci d'avance
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[invite715e605c]

LArge question, ca dépend de quel tissu on parle. J,ai fait souvent de la culture primaire, peau d'un foetus de vache, de cheval, culture de rein de chat ou de souris transgénique, fibroblaste de souris, testicule de porc,neurone (hyppocampe) plus compliqué.
Plus l'animal est jeune plus c'est facile, idéalement un featus.Souvent on obtient un mélange de cellules, example le rein est composé de divers tissus, mais après plusieurs passages, seules les fibroblastes reste.
Utilisé une bonne trypsine blanche à 0.25% au moins.Certains tissu demande de la collagénase (Leydig).
Maniper dans des flacons à trypsination et récolter les 3 trypsination dans des puits différents.Les cultures primaires dépassent rarement 10 passage.La plupart poussent dans du DMEM selon les tissus. C.est bref!!

[invite549561d6]

bonsoir

Je recherche un protocoleavec un exemple du culture cellulaire primaire et la culture des lignés merci d'avance

[invitea9a4c686]

Bonjour,
Je suis en train de mettre au point la culture de cellule primaire épithéliale rénale.
Généralement:
1/On transporte les organes sur la glace, et on se magne, car la nécrose des tissus et l'hypoxie est rapide
2/ On dissocie les tissus (collagenase, dispase, ou autre)
3/ On purifie le mix en sélectionnant la lignée (soit par des systèmes de filtration, soit par des systèmes de sélection positive ou negative, basées souvent sur des billes couplées à des anticorps spécifique des lignées cellulaire
4/ On met en culture
a/ sur un support coaté ou non
b/ dans un milieu auquel il faut vraiment réfléchir

On peut aussi
> Déposer sur un support de culture un explant (une coupe de rein par ex, ou un nerf, ou un fragment de peau), dont les tissus ont été dissociés et les cellules sortent et colonisent la boîte
>Lacération le tissu, le dissocier +passage au mortier (tout doux le mortier, un mini mortier fait exprès pour ce faire) et filtration, 200 micromètre puis 100 puis 40micromètre et on met en culture le filtré et le filtrat au cas où

Aussi, la grande question du milieu de culture, faut vraiment se pencher sur la composition. La concentration en sérum est importante, et faut choisir, si tu veux amplifier des fibroblastes pas de probleme, tu mets bcp de sérum, (15%)
mais si tu veux amplifier des cellules épitheliales, endotheliales, ou autres, il faut diminuer la concentration en sérum, sinon, les fibroblastes présent dans le tissu vont s'éclater et coloniser tes cultures et donc les contaminer.
Sujet jeune, je suis bien d'accord.
Et aussi, attention, pour la composition, bien mettre les facteurs de croissance conseillés pour le tissu d'intérêt

J'espère ces quelques notes vous aideront
Bonne chance (il en faut un peu aussi!)

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite5796d8ec]

pour la culture primaire, cela dépend vraiment du tissu ou de la zone dont tu as besoin. Je fais de la culture primaire du striatum et c'est pas la même chose que la culture primaire du cortex par exemple.
peux tu nous dire ce que tu aimerais faire??
une lignée ça s'entretient au sens propre. Chaque fournisseur te livre une fiche technique pour l'entretenir