technique du double hybride

[invite0db3aadd]

bonjour,est ce que quelqu'un pourrait m'expliquer le principe de la technique double hybride? ce serai gentil,merci!
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[piwi]

Bonsoir.

La technique du double hybride permet de démontrer une interaction directe entre deux protéines.
Grossièrement et en quelques étapes:
Le principe repose sur l'utilisation d'un facteur de transcription avec deux domaines, un domaine de liaison à l'ADN et un domaine de transactivation.

On dispose d'une protéine cible couplée au domaine de liaison à l'ADN et de protéines pouvant potentiellement interagir avec la cible couplées au domaine de transactivation de l'ADN.

En utilisant une séquence d'ADN codant pour un gène rapporteur sous le controle d'un promoteur activé par le facteur de transcription, on peut fixer la cible sur l'ADN via le domaine de liaison de l'ADN du facteur de transcription. Comme le système ne possède pas le domaine de transactivation, il n'y a pas d'activation de l'expression du gène.

L'experience consiste à tester la capacité des proteines d'un complexe putatif à se lier à la protéine cible.
Si il y a interaction, il y aura reconstitution du facteur de transcription actif du fait de la proximité des domaines de liaison à l'ADN et du domaine de transactivation. Du coup le gène rapporteur sera activé.

Cordialement,
piwi

[invite4ff72fd5]

Salut

la technique du double hybride sert à démontrer l'interaction entre deux protéines .

Soit protéine X et Y; interagissent elles entre elle?

On réalise 2 protéines de fusion .
Protéine X + domaine d'activation d'un gène rapporteur
Protéine Y + domaine de fixation à la séquence promotrice du gène rapporteur.

Ainsi pour avoir activation du gène rapporteur il faut une mise en contact du domaine d'activation au domaine de fixation. Ceci étant réalisé si il y a intéraction entre protéine X et Y .

Je te scanne un schéma pour y voir plus clair .


EDIT : ERF devancé par Piwi le temps d'écrire le message

[invite4ff72fd5]

GAL4-DBD = Domaine binding .

[A voir en vidéo sur Futura]