salut à tous,
je souhaite étudier l'opéron lactose
j'ai trouvé une problématique, cependant j'ai un problème:
comment peut-on doser une protéine (en l'occurence la B-gal à partir de culure batériennes?
j'ai penser aux méthodes de dosage par l'ONP mais concretement je ne sais pas si je dois prélever les bactéries de la boite de petri (colonies) et réaliser le dosage directement?
je sais pas si je suis trés claire
aidez moi
merci
IL faut une culture liquide pour cela.
Ensuite tu peux doser une activité totale avec l'ONPG, et avec les données biblio tu peux théoriquement connaître la quantité d'enzyme active. Mais l'incertitude sera élevée.
Jean-Luc
La violence est le dernier refuge de l'incompétence.
Salvor Hardin
comment ça une culture liquide?
donc je devrais pas cultiver su boite de pétri? comment faire alors?
explique moi stp
Salut
a partir des colonies sur la boite de petri tu en prends une que tu mets dans un milieu de culture liquide (5ml) tu mets le tout a agiter la nuit a 37°C
le lendemain matin, tu centrifuges tes cellules, tu recuperes le culot de bacterie que tu lyses (il y a plusieurs methode de lyse, avec bille de verres, au chloroforme etc...) ensuite tu preleve quelques microlitres de ton extrait tu ajoutes a l'ONPG et un tampon de reaction et tu incubes le tout a 30°C.
Le clivage de l'ONPG par la beta-gal va faire apparaitre une coloration jaune mesurable au spectrophotometre a 420nm
Yoyo
d'accord, je crois avoir compris, c ce que je comptais faire. merci pour cette précision
