Salut à tous ! Je voulais savoir qu'elle est la différence entre la sensibilité et l'hypersensibilité à la DNase I. Je sais que c'est en rapport avec la structure de la chromatine et l'accessibilité de facteurs de transcription à certaines régions de l'ADN mais je n'arrive pas a voir la différence entre les deux . Merci
seulement les gènes actifs sont sensibles à la DNAseI,
les gènes inactifs ne sont pas sensibles, donc, où il n'y a pas la fixation des facteurs géneraux de transcription.
la hétérochromatine n'est pas sensible à la DNAse,
l'euchromatine est sensible
cela s'explique que l'euchromatine renferme les gènes actifs, l'autre à l'invers.
un exemple
Sites sensibles à la DNaseI
Cette expérience permet de mettre en évidence la structure
particulière de la chromatine en corrélation avec l’état
transcriptionnel de gènes particuliers. On purifie des noyaux (ou
on utilise des cellules traitées au NP40-détergent non ionique)
que l’on traite à la DNaseI faiblement concentrée. L’ADNg est
extrait et analysé par Southern blot avec un ADNc correspondant
à un gène exprimé par la cellule ou qui l'a été récemment. Dans ce cas on
n'obtient pas de signal. Si l’hybridation est réalisée avec un ADNc non
exprimé dans ce type cellulaire on obtient un signal. Une absence de
signal signifie que l’ADNg a été digéré par la DNaseI. Si l’accessibilité à
la DNase est permise dans une région particulière elle l'est aussi pour les
facteurs transcriptionnels et le gène est donc probablement transcrit ou
susceptible de l’être.
Biologiquement, la différenciation cellulaire « installe » les gènes exprimés ou non dans une structure
chromatinienne particulière.
Sites hypersensibles à la DnaseI
Si on utilise la DNaseI de manière excessivement diluée, cette
dernière se comporte comme une enzyme de restriction. On met
ici en évidence des sites hypersensibles qui produisent des
fragments de tailles définis et
reproductibles. Les coupures sont
analysées par Southern avec une
sonde assez grande pour recouvrir le promoteur Une expérience
témoin est réalisée sans DNaseI. Les sites hypersensibles caractérisent
les bases particulièrement exposées au niveau
au niveau d’un promoteur et qui sont impliquées dans le
mécanismes de régulations transcriptionnelles.
Merci beaucoup futurellight !! Ta réponse m'a vraiment éclairé. Je vois mieux la différence maintenant.
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