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MCF7 cellules cancéreuses, 3 bandes ARN?



  1. #1
    sarra672

    Question MCF7 cellules cancéreuses, 3 bandes ARN?

    Bonjour à tous!

    je travailles sur des cellules MCF7 de cancer mammaire humain donc eucaryote. après mon extraction d'ARN et migration sur gel j'observe 3 bandes or je n'attends que 2 bandes correspondant aux ARN r 18S et 28S.

    ma 3ème bande est de taille plus faible.

    les 3 bandes apparaissent clairement, il n'y a pas de smear.

    à quoi correspond cette 3ème bande?


    merci de votre réponse!

    sarra

    -----


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  3. #2
    Vinc

    Re : MCF7 cellules cancéreuses, 3 bandes ARN?

    Salut!
    Question bête...à quelle taille ets la troisième bande?? Est ce que ça peut correspondre (au milieu de la séquence) d'un des 2 rRNA?? Bon je ne pense pas mais on sait jamais, c'est tellement con

    Vinc
    Primum non nocere.

  4. #3
    futurelight

    Re : MCF7 cellules cancéreuses, 3 bandes ARN?

    quelle est la localisation de votre 3 ième bande?

  5. #4
    sarra672

    Re : MCF7 cellules cancéreuses, 3 bandes ARN?

    Citation Envoyé par futurelight Voir le message
    quelle est la localisation de votre 3 ième bande?
    la 3 ème bande est localisé lègèrement en dessous de ces 2 bandes qui sont trés proches l'une de l'autre.
    je n'ai pas utilisé de marqueur de taille.

    si vous voulez que je vous envoie la photo, ça sera sans pb!

    merci de vos réponses!

  6. #5
    futurelight

    Re : MCF7 cellules cancéreuses, 3 bandes ARN?

    Citation Envoyé par sarra672 Voir le message
    la 3 ème bande est localisé lègèrement en dessous de ces 2 bandes qui sont trés proches l'une de l'autre.
    je n'ai pas utilisé de marqueur de taille.

    si vous voulez que je vous envoie la photo, ça sera sans pb!

    merci de vos réponses!


    oui, je voudrais bien voir la photo,

  7. A voir en vidéo sur Futura
  8. #6
    Vinc

    Re : MCF7 cellules cancéreuses, 3 bandes ARN?

    Oui moi aussi!

    Vinc
    Primum non nocere.

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  10. #7
    sarra672

    Re : MCF7 cellules cancéreuses, 3 bandes ARN?

    voilà la photo!

    là on voit la 3 ème bande mais sur d'autres gel elle est beaucoup plus marquée!

    merci
    Images attachées Images attachées

  11. #8
    futurelight

    Re : MCF7 cellules cancéreuses, 3 bandes ARN?

    Citation Envoyé par sarra672 Voir le message
    voilà la photo!

    là on voit la 3 ème bande mais sur d'autres gel elle est beaucoup plus marquée!

    merci
    Combien d'échantillons avez-vous utilisé ?

  12. #9
    futurelight

    Re : MCF7 cellules cancéreuses, 3 bandes ARN?

    Ce n'est pas normal ?
    si vous aviez mis que dans 2 puits ou carreaux , vous auriez dû avoir que 2 bandes.

  13. #10
    Vinc

    Re : MCF7 cellules cancéreuses, 3 bandes ARN?

    Citation Envoyé par futurelight Voir le message
    si vous aviez mis que dans 2 puits ou carreaux , vous auriez dû avoir que 2 bandes.
    ????
    J'ai pas tout comprit....

    Vinc
    Primum non nocere.

  14. #11
    futurelight

    Re : MCF7 cellules cancéreuses, 3 bandes ARN?

    c'est moi, qui n'ai pas bien compris, elle demande la bande qui est légèrement visualisée. J'ai compris la bande
    1, 2 et la troisième,
    enfin,,,, pardon

  15. #12
    sarra672

    Re : MCF7 cellules cancéreuses, 3 bandes ARN?

    Citation Envoyé par Vinc Voir le message
    ????
    J'ai pas tout comprit....

    Vinc
    moi non plus!

    non ce que je ne comprend pas c'est la 3 ème bande obsérvé lors de mes dépots d'ARN extrait dans chacun de mes échantillons pour n'importe quel puit!

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  17. #13
    Vinc

    Re : MCF7 cellules cancéreuses, 3 bandes ARN?

    Citation Envoyé par sarra672 Voir le message
    non ce que je ne comprend pas c'est la 3 ème bande obsérvé lors de mes dépots d'ARN extrait dans chacun de mes échantillons pour n'importe quel puit!
    Oui ça moi par contre j'avais bien comprit
    J'y réfléchis...

    Vinc
    Primum non nocere.

  18. #14
    futurelight

    Re : MCF7 cellules cancéreuses, 3 bandes ARN?

    je suppose que vos échantillons d'ARN ne sont pas purifiés,
    j'ai eu présque les mêmes résultats, avec les échantillons non purifiés et puis j'ai fait une purification, et après la purification ces troisièmes bandes n'étaient plus visualisées sur le gel.

  19. #15
    sarra672

    Re : MCF7 cellules cancéreuses, 3 bandes ARN?

    effectivement mes échantillons d'ARN sont extraits o trizol (phénol-isothiocyanate de guanidine)-chloroforme, précipités à l'isopropanol et lavé à l'éthanol. protocole classique!

    ça voudrait qu'il ya une possibilité de présence de contamination?

  20. #16
    Vinc

    Re : MCF7 cellules cancéreuses, 3 bandes ARN?

    Mouai... ou de dégradation! Parce que la contam est de faible taille seulement, donc c'est possible mais un peu surprenant... M'enfin pourquoi pas!

    Vinc
    Primum non nocere.

  21. #17
    sarra672

    Re : MCF7 cellules cancéreuses, 3 bandes ARN?

    mais généralement la dégradation est plus valable en présence de smear or ici c'est une bande trés nette!

    si c'est une contamination ça serait pas quoi et tjrs à cette meme taille?

    encore une question sans réponse!
    ah oui c'est ça la science!

  22. #18
    gorben

    Re : MCF7 cellules cancéreuses, 3 bandes ARN?

    Salut,

    Je dirais a vu de nez que cette bande est aux alentours de 100-150 pb et que c'est des tRNA...

    A+

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  24. #19
    sarra672

    Re : MCF7 cellules cancéreuses, 3 bandes ARN?

    possible mais je ne pense pas qu'ils soient en % aussi élevé pour etre visible sur mon gel!

    je ne sais pas!

    à+

  25. #20
    Yoyo

    Re : MCF7 cellules cancéreuses, 3 bandes ARN?

    Salut

    cette bande est au choix l'ARNr 5.8S ou les tRNA difficile a dire sans marqueur, mais vu la taille des deux autres rRNA je pencherai pour le 5.8S

    En tout cas bravo ils sont beaux ces ARNs! Oublie la degradation c'est surement pas ca.

    YOyo

  26. #21
    sarra672

    Re : MCF7 cellules cancéreuses, 3 bandes ARN?

    bien merci pour toute vos réponse!

    amicalement

    sarra

  27. #22
    sacourabibi

    Re : MCF7 cellules cancéreuses, 3 bandes ARN?

    Bonjour,
    je ne sais pas si vous avez trouvé l'origine de la fameuse troisième bande ?
    j'ai eu des surprises aussi avec les cellules MCF7, avec des analyses de facs
    il semblerait qu' il y ai une sous population de cellules "au sein" de la lignée .

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