Bonjour!
Je me demandais pourquoi on créait des protéines de fusion avec des immunoglobulines (exemple :la protéine de fusion CTLA4-Ig)
Est-ce que c'est le meme principe que les protéines de fusion avec GFP qui émettent de la fluorescence et qui permettent ainsi d'etre localisées?
Si quelqu'un pouvait m'éclairer, j'en serai ravie.
Merci d'avance.
On utilise ces protéines de fusion dans le cas du cancer
Pardon???????Envoyé par futurelight
Tu peux préciser????
Vinc
Primum non nocere.
les protéines de fusion permettent de neutraliser l’activité d’une cellule en réduisant ses capacités de prolifération , et dans le cas des cellules cancereuses c'est très important et ce qu'on veut avoir.
C'est très très imprécis tout ça..... J'ai l'impression que c'est encore assez flou pour toi!
Les protéines de fusion sont utilisées dans tous les domaines de la biologie.... Et ne ce qui concerne la cancéro, elles sont en effet très importantes dans certains cancers mais pas du tout pour ce que tu as dit...
Vinc
Primum non nocere.
j'ai proposé pour les cellules cancereuses,
c'est très complexe, et très lié à l'immunologie, cela prend au moins une heure pour expliquer. et je ne sais pas vraiment tous les détails.
par contre, je trouve qu'il y a une pression.
Ne t'en fais pas pour les détails
Qu'est ce que tu veux dire??
A+
Vinc
Primum non nocere.
Merci de votre réponse mais je ne comprend pas très bien : les protéines de fusion limitent la prolifération des cellules? toutes les cellules ou uniquement les cellules cancéreuses?
La protéine de fusion qui me pose problème n'est pas utilisée sur des cellules cancéreuses.
Est-il possible que la protéine de fusion soit utilisée dans l'objectif de découvrir les fonctions de la forme soluble d'une protéine transmembranaire déja connue? La protéine de fusion pourrait-elle "mimer" les fonctions de la protéine soluble initiale?
En fait on utilise ces protéines de fusion pour faciliter la purification de la protéine et son couplage ultérieur à autre chose pour de la vectorisation. En général c'est juste le domaine Fc qui est pris dans la protéine de fusion, si tu veux en savoir plus envoie moi un MP.
Jean-Luc
La violence est le dernier refuge de l'incompétence.
Salvor Hardin
Salut,
le CTLA4Ig, tout comme le CD40Ig, sont des molécules immunosuppressives dans le sens où elles empechent d'avoir une costimulation efficace des lymphocytes.
Le CTLA4Ig permet ainsi d'étudier le rôle de la voie CD28/B7 dans l'activation T en bloquant l'accès de B7 (1 et 2) par le CD28. C'est le CTLA4 qui a été choisi car il possède une affinité supérieure pour B7 comparativement à CD28. L'intercation CTLA4Ig/ B7 est ainsi plus stable que s'il y avait CD28Ig/B7 (risque de compétition avec le CD28 membranaire).
et j'ajouterai que le fragment Fc permet d'augmenter le poids moléculaire de la protéine, évitant son élimination rapide par le rein et en favorisant son "recyclage" vers la circulation sanguine via des récepteurs aux fragment Fc présents quelque partau niveau du néphron.
Comment peut-on réaliser une protéine de fusion avec un vecteur d'expression ?
Par exemple, j'ai les séquences codantes de 2 protéines A et B et je veux la protéine de fusion AB.
Est ce qu'il faut une séquence IRES au milieu si j'utilise qu'un seul promoteur ?
La séquence IRES conduira t-elle à un ARNbicystronique ou à deux ARNm différents (j'ai du mal à le voir ça) ?
Ou faut-il mettre les 2 séquences côte à côte ou espacées d'un multiple de 3 ?
Qui pourrait m'éclairer je suis un peu perdu...
Pour réaliser une protéine de fusion, la plupart du temps on ligue une séquence de restriction en 3' de l'ADNc codant la protéine N-terminal et la même séquence de restriction en 5' de l'ADNc codant la protéine C-terminale. On choisi une séquence qui une fois clivée génère des bouts collants. Et le positionnement de ces séquences se fait en accord avec le futur cadre de lecture de chacun des ADNc. Après ligation, on clive avec l'enzyme de restriction et on met les ADNc ensemble et en présence de DNA ligase (la IV je crois..) et avec de l'ATP. C'est un grand raccourci que j'ai pris là, juste pour se faire une idée.
Mettre une séquence IRES entre les deux ADNc revient à faire un ARNm bicistronique en effet, donc un ARNm de fusion si on veut, mais deux protéines bien distinctes après traduction.
Greg
Never give up.
J'ai rien compris
Si tu pouvais faire encore plus simple stp...
Salut,
Pour faire une protéine de fusion AB, il te suffit simplement de mettre la séquence codante de B juste à la suite de celle de A. Il faut juste enlever le codon stop à la fin de la séquence de A (sinon tu ne produiras que la protéine A). Tu vas alors obtenir un seul ARNm qui sera traduit en protéine AB. Tu n'as donc pas besoin d'IRES entre A et B, ni d'espace.
Cordialement,
Zellus
D'accord là j'ai compris!
Merci à tous les 2 !
