Ogm

[invitebe21bc8c]

bonjour à tous
je me suis documentée sur la transgénèse et toutes les techniques qui y sont utilisées, seulement voilà, j'ai quelques questions à vous poser :
1- pourquoi la biolistique et l'électroporation ne sont utilisées que chez les végétaux? ( ces méthodes sont elles applicables aux cellules animales)
2- en voyant toutes les techniques de transgénèse, (microinjection, incubation avec de l'adn, biolistique...) j'en déduis que l'intégration du transgène est "aléatoire" ou non ciblée, cela n'a - t il pas de conséquences graves?? par ex inactivation d'un gène fonctionnel
merci de vos réponses
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[invitec9f0f895]

bonjour à tous
je me suis documentée sur la transgénèse et toutes les techniques qui y sont utilisées, seulement voilà, j'ai quelques questions à vous poser :
1- pourquoi la biolistique et l'électroporation ne sont utilisées que chez les végétaux? ( ces méthodes sont elles applicables aux cellules animales)

Ce n'est pas le cas, la biolistique est aussi utilisé par els personnes travaillant sur le ver C. elegans; et l'electroporation est couramment utilisée sur les bacteries ou les cellules de mammiferes. Ces techniques ne sont certainement pas limitées aux cellules vegetales.

2- en voyant toutes les techniques de transgénèse, (microinjection, incubation avec de l'adn, biolistique...) j'en déduis que l'intégration du transgène est "aléatoire" ou non ciblée, cela n'a - t il pas de conséquences graves?? par ex inactivation d'un gène fonctionnel
merci de vos réponses

Il n'y a aucune relation de cause a effet entre la technique utilisée pour faire rentrer de l'ADN dans une cellule et la facon dont cet ADN va s'intégrer. Ceci dit il est vrai que l'insertion dans les cellules vegetales est aleatoire. Si cela inactive un gene essentiel, alors la plante ne se developpera pas, tout simplement. Je precise qu'il est possible a posteriori de savoir ou le transgene s'est inséré.

Yoyo

[invite200aa768]

Les techniques citees s'utilisent effectivement aussi sur cellules animales, comme l'a fait remarque yoyo...

Quant au site d'insersion, il est considere en general comme aleatoire pour les techniques classiques (pas en recombinaison homologue par exemple). Quoi que je ne suis pas certain que toutes les zones d'ADN soient egalement succeptible (sequences particulieres, structure secondaire...).

Mais vu la proportion d'ADN non codant, les probabilites sont en notre faveur dans l'evitement d'un gene important...mais je ne suis pas specialiste, je suis un bon vieux physiologiste...

[pommier]

Mais vu la proportion d'ADN non codant, les probabilites sont en notre faveur dans l'evitement d'un gene important....

Bonjour
en admettant que l'ADN non codant soit sans importance

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite200aa768]

Je suis d'accord, rien ne prouve que l'ADN non codant soit sans importance, je ne repondais qu'a la question suivante...

par ex inactivation d'un gène fonctionnel

[invitebe21bc8c]

merci pour vos suggestions, je pense que tout compte fait l'insertion est aléatoire sauf dans le cas de la recombinaison homologue, en attendant, je vais me renseigner un peu plus !!
merci à tous

[invitef2aa417a]

Confère l'essai de Fischer à l'hopital Necker en 1999, non ?

Soin par thérapie génique d'enfants-bulles atteints de syndrome d'immunodéficience sévère lié à l'X. Finalement sur 12 traités, 3 ont déclaré après coup une leucémie, et un en est mort (ou mes souvenirs ne sont plus bons ? )

Enfin un transgène mal intégré peut ne pas provoquer que "la mort de la cellule receveuse", mais au contraire, lui donner un "cadeau empoisonné" qui entraine sa supériorité sur d'autres, une fois libérée de certains contrôles du cycle cellulaire. Supériorité qui si elle est trop importante rend la cellule et sa descendance dangereuse.
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En fait j'ai eu un doute, j'ai re-regardé le sujet et il n'est fait nulle part mention de l'utilisation de vecteurs viraux, ce à quoi je pensais.

Mais je ne pense pas que ca change la possibilité qu'un transgène s'intègre de manière à faire "perdre les pédales" à la cellule au lieu de simplement provoquer sa mort (ce qui serait moindre mal)

par contre, le coup des vecteurs viraux qui ont plus tendance à s'insérer à certains endroits, ca n'entre plus dans le cadre de la discussion.

edit : ah oui, par "biolistiques" vous entendez la projection à haute vitesse de fragments d'ADN sur des cellules (via air comprimé, ou inertie, on avait parlé de ca en cours) Si non, je veux bien un petit topo *^_^*

[invite71f23525]

Oui je me souviens bien de ce cas (le cas numéro 4) lors de l'essai de thérapie génique sur les enfants bulles. Mais c'est vraiment faute à "pas de chance". Car le transgène s'est inséré en amont d'un oncogène exprimé dans les leucémies. Donc l'oncogène en question (LHO) étant exprimé, le cas 4 a développé une leucémie. Mais il faut souligner aussi que les autres enfants ont pu être scolarisé et même vaccinés, preuve du succès de cette technique, preuve qu'il ne faut pas la laisser croupir dans l'oubli. Elle peut être une véritable solution d'avenir pour lutter contre les maladies génétiques rares et moins rares. Mais c'est sûr que le transgène doit être soumis à rude épreuve pour éviter des "homicides involontaires".

Greg

[invite7eccd2c1]

au sujet de la biolistique, j'aimerais savoir si quelqu'un sait se que devienne les micro billes métalique enrobé de l'adn une fois projeter sur les cellules?

[invite02cefc91]

Su tu bombardes des cellules qui sont posés sur un milieu gélosé, des billes vont se retrouver sur le milieu entre les cellules. Tes cellules, tu les isolent ensuite ....