Coucou!!
J'ai un petit probleme en enzymo et plus précisement quand il s'agit de calculer un taux d'inhibition!
Dans le cas d'un inhibiteur non compétitif,on a un V0 et Vapp. Pour calculer le taux d'inhib. Je fais: (V0-Vapp)/V0.
Sachant que : V0= (Vmax*[S])/(Km+[S]) et Vapp =( Vmax'*[S])/(Km+[S]) .
Mais pour un inhibiteur compétitif ,je sais pas faire puisque on a la meme vitesse max pour les 2.
Merci de m'aider!!
Salut, je ne suis pas un expert en enzymo mais je peux te conseiller 2 méthodes qui sont souvent dans les publis. Tu peux tester différentes concentrations de ton inhibiteur pour une concentration donnée en substrat et à un temps donné (en restant dans la linéarité) et calculer l'IC50 (50% d'inhibition de l'activité enzymatique). La deuxième méthode est plus satisfaisante (à mon avis). Tu fais un Lineweaver Burke. C'est à dire que tu testes différentes concentrations en substrat seul et en présence d'une concentration donnée en inhibiteur (à un temps donné). Puis tu représentes les résultats en double inverse: 1/V (en ordonnée) et 1/S en abscisse. Tu auras 2 droites (1 avec et 1 sans l'inhibiteur). L'intersection des droites obtenus avec l'axe des ordonnées correspond au 1/Vmax. Comme tu l'as dis, il n'y aura pas de différence pour un inhibiteur compétitif (il se fixe sur le même site donc si la concentration du substrat tend vers l'infini, il a le dessus sur l'inhibiteur). L'intersection des droites obtenus avec l'axe des abscisses correspond au -1/Km. Pour une inhibition compétitif, en présence d'inhibiteur tu as une augmentation du Km (c'est le Km app). Tu peux alors calculer La constante d'inhibition avec l'équation Kmapp=Km(1+[I]/Ki).Souvent dans les publis il font d'abord L'IC50 puis le calcul du KI. Mais bon ça dépend
Complètement d'accords...
Perso je ferais même dans l'autre sens, l'IC50 venant confirmer ton résultat avec Lineweaver Burke !
amicalement,
Greg
Merci d'avoir répondu si vite!
Mais malgré vos explications détaillées une zone d'ombre persiste.
Dans le cas d'un inhibiteur compétitif ( :mon probleme) , ce n'est pas le calcul de Kmapp qui me dérange, mais celui du taux d'inhib. c à d du rapport (V0-Vapp)/V0
Et vu qu'on a ,d'apres moi ,V inchangée , j'aurai 0 % ??!! Que puis je dire de cet inhibiteur ,qui est pourtant en compétition avc le substrat sur le site actif de l'enzyme? comment interpréter ce pourcentage?
(Dans le cas d''un inhibiteur compétitif ,on a augmentation du Km (Kmapp= Km+(1+[I]/Ki) ) et Vmax=constante )
Merci de m'aider.
amicalement,
Fillotte
Salut
Si on reprend ta formule:
V0= (Vmax*[S])/(Km+[S]) et Vapp =( Vmax'*[S])/(Km+[S]) .
Pour Vapp, il faut utiliser les paramètres définis en présence d'inhibiteur (sinon tu auras toujours 0) soit:
Pour un inhibiteur compétitif:
Vmax(app)=Vmax et Kmapp supérieure à Km soit Vo supérieure à Vapp
Il faut donc déterminer expérimentalement les paramètres par Lineweaver Burke ou partir directement (ça me parait plus simple) de tes vitesses expérimentales plutot que d'utiliser une équation intermédiaire pour les calculer.
Merki Léo2 et Squalor pour votre aide!!!!
à bientot peut etre!
amicalement,
Fillotte
