substrat inhibiteur et constante d'inhibition

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bonjour à tous,

Je suis en troisième année de thèse, plutot orienté microbiologie et biologie moléculaire, l'enzymo n'a jamais été mon fort, mais voilà j'ai un problème.

Mon travail consiste, entre autres, à déterminer les paramètres cinétiques de la dénitrification en fonction de différents facteurs....
Et là je me retrouve fasse à un problème : un de mes substrats est un inhibiteur, bon ça je le savais, j'ai une belle courbe et tout mais ma responsable (qui n'y connais rien en enzymo)veut absoluement que je sorte un Km et un Vm. J'ai donc trouvé l'équation de MM suivante :

V0 = (Vmax+[S]) / [S] + Km + ([S]²/Ki)

Comment je fais pour déterminer Ki ????
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[invite1f748f81]

ce que j'ai fais en TP : tracer 1/V en fonction de 1/S avec les ordonnées pas sur le bord de la page , t'obtiens une droite qui va couper l'axe des abscisses en un point ce point c'est -Km. Ma formule a moi c'est : Vi = Vmax.[S]/Km +[S] donc avec ta courbe tu as Vmax .... a priori ca serait ca mais l'avis de personnes plus experimentées serait la bienvenue

[inviteca614eab]

Salut

Dentiste fou à tout à fait raison, il faut faire une représentation en lineweaver burke. Pour cela, tu fais varier les concentrations en substrat et tu détermines la vitesse à ses différentes concentrations.Tu traces le graph 1/V en fonction de 1/S.L'intersection avec l'axe des ordonnées correspond à 1/Vmax et celle avec l'axe des abscisses correspond à -1/Km. Il faut ensuite faire exactement la meme expérience en présence de ton inhibiteur à une concentration donnée (I). Si l'inhibiteur est compétitif, tu auras le même V max mais tu auras une augmentation du Km (appelé Km apparent) (-1/Km plus faible). A partir de là, tu peux déterminer le Ki: avec l'équation Km(app)=Km (1+I/Ki)
Si l'inhibition n'est pas compétitif, le Km ne varie pas mais le Vmax diminue: tu as la relation Vmax(app)=Vmax/(1+I/Ki).
Si je suis pas clair,je peux essayer de reformuler

[invite1f748f81]

demonstration et representation graphique ici : http://en.wikipedia.org/wiki/Michaelis-Menten_kinetics et tres bien l'explication de leo

[A voir en vidéo sur Futura]