Synchronisation G1/S par double blocage thymidine

[invitea0443c8c]

Bonjour à tous!
Est ce que certains d'entre vous ont dèjà utilisé un protocole de double blocage avec une transfection entre les deux, sur les cellules Hela : blocage/transfection/re-blocage???
Si oui j'aimerai recueillir vos impressions parce que pour le moment les miennes sont mitigées. Enormément d'apoptose, et quasi abscence de synchronisation....

Autre question, même sans synchro, y'a t-il un bruit de fond sur les cyclines A/B/D en western???

Merci d'avance!

V.

P.S: 25µM thymidine; 24µM déoxycitidine dans DMEM après transfection lipofectamine et avant le deuxième blocage.
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[invite71f23525]

J'ai déjà entendu parler du double blocage thymidine. Mais en considérant que dans une population cellulaire une grande proportion est en G1, pourquoi ne pas transfecter puis induire le blocage thymidine, sans étape de blocage avant transfection... Enfin je suppose que tu y as pensé mais c'est plus ou moins une question que je te pose. Le rendement peut être moins bon mais au moins plus grand qu'actuellement, non?

Greg

[invitea0443c8c]

C'est un autre protocole. Un simple blocage donne une synchro moins propre.... Mais là je parle de souble blocage.

V.