Comptage cellulaire et test colorimétrique au MTT ?

[invite3beef151]

Bonjour amis biologistes !!

J'aimerais vous poser quelques questions qui trottent dans ma tête depuis un TP où l'on devait compter des cellules.

Déjà première question toute bête : le comptage cellulaire, ça sert à quoi exactement ? Est-ce vraiment d'une grande utilité ?

On a utilisé le test colorimétrique au MTT pour quantifier les cellules. Mais comparé à l'utilisation d'une cellule de Malassez, ça m'a paru bien compliqué.
En faites, j'aimerais savoir laquelle des 2 techniques est la plus utilisée en laboratoire et pourquoi ?
Selon moi, c'est la MTT vu qu'elle m'a l'air plus précise que la cellule de Malassez qui ne fait qu'une moyenne des cellules trouvées dans ses différentes lignes ... m'enfin je peux me tromper.
Qu'en pensez-vous ?

A bientôt !!

J'attend vos réponses avec impatience .... Merci d'avance
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[invitea0443c8c]

Bonsoir!

Déjà première question toute bête : le comptage cellulaire, ça sert à quoi exactement ? Est-ce vraiment d'une grande utilité ?

Le comptage cellulaire est fondamental en recherche pour savoir, entre autre, sur combien de cellules on travaille. Il permet également d'apprécier une augmentation ou une diminution de prolifération, de mort cellulaire, ....

On a utilisé le test colorimétrique au MTT pour quantifier les cellules. Mais comparé à l'utilisation d'une cellule de Malassez, ça m'a paru bien compliqué.
En faites, j'aimerais savoir laquelle des 2 techniques est la plus utilisée en laboratoire et pourquoi ?

Le MTT permet de colorer les cellules vivantes (en réagissant avec un élément de la chaine respiratoire) et le dosage donne ensuite une estimation de ce nombre de cellules vivantes.
La lame de Malassez seule donne le nombre de cellules totales mais on l'utilise essentiellement en association avec une coloration au bleu trypan qui pénétre dans toutes les cellules mais est éjecté par les cellule vivantes et reste donc dans les cellule smortes, ce qui donne une estimation du nombre de cellules vivantes...

Selon moi, c'est la MTT vu qu'elle m'a l'air plus précise que la cellule de Malassez qui ne fait qu'une moyenne des cellules trouvées dans ses différentes lignes ... m'enfin je peux me tromper.
Qu'en pensez-vous ?

Pour avoir utilisé les 2 techniques je dirai qu'elles sont assez équivalentes à condition de compter suffisament de cellules en Malassez.
Aujourd'hui j'utilise un compteur cellulaire qui reprend un peu le principe de la Malassez en colorant les cellules au bleu trypan, mais tout est automatisé et on connait même le diamètre moyen des cellules, et d'autres paramètres... Les compteurs sont beaucoup plus rapides et précis mais coutent bien évidemment horriblement cher...

V.

[invite3beef151]

Merci pour ta réponse !

Pour avoir utilisé les 2 techniques je dirai qu'elles sont assez équivalentes à condition de compter suffisament de cellules en Malassez.

Ce que tu veux dire c'est qu'on est obligé de faire plusieurs cellules en Malassez pour pouvoir déterminer un nombre exact de cellules ?

J'essaie de dégager les avantages et les inconvénients de ces 2 méthodes mais à part le fait que la cellule de Malassez soit une technique plus ou moins approximative dans la quantification des cellules je ne vois rien d'autres surtout du point de vue de la MTT ...

Merci d'avance ...

++

[invitea0443c8c]

Ce que tu veux dire c'est qu'on est obligé de faire plusieurs cellules en Malassez pour pouvoir déterminer un nombre exact de cellules ?

Oui, en fait plus tu comptes de cellules et plus, statistiquement, tu seras proche de la valeur réelle...

V.

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite3beef151]

Ok merci ...

Sinon toi qui a testé les 2 types de quantification cellulaire, laquelle préfères-tu et pourquoi (ça peut-être d'un point de vue technique, pratique ...) ?

Le test au MTT me paraît être plus précis que la cellule de Malassez mais cette dernière est beaucoup plus rentable (le matériel reste assez basique) même si elle utilise un produit toxique (bleu de Trypan).

Etant donné que le MTT repose sur une réaction enzymatique dans les cellules (déshydrogénases mithocondriales), cette dernière peut-elle avoir des résultats falsifiées en cas de dysfonctionnement de ces enzymes ? Désolé si je m'égare un peu mais j'essaie de trouver des inconvénients lol

[invitea0443c8c]

Salut!
Ces 2 techniques sont fiables! Elles présentent toutes les deux des avantages et des inconvénients mais comme toutes les techniques... Je n'ai pas spécialement de préférence car aujourd'hui comme je te l'ai dit j'utilise exclusivement un compteur, mais certaines personnes de mon labo comptent encore leur cellules avec une Malassez : c'est rapide et plus facile à mettre en place qu'un test MTT,....

V.