Blot: pourquoi papier filtre ?

[invite280504d9]

Salut!

C'est un peu embarrasant, mais je me demandais pourquoi on place le gel et la membrane entre du papier filtre ( Whatman ) lors d'un transfert.

Merci!
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[invite85934679]

Salut,

Au risque de dire une grosse bétise, il m'a toujours semblé que c'était pour absorber ton tampon, le permettant de traverser ton gel et ta membrane pour transférer les prots de ton gel sur ta membrane.

FX

[invite71f23525]

Sans grande conviction, il me semble que cela sert à éliminer les bulles d'air qui pourrait se placer entre le tampon et la membrane d'un côté, entre le tampon et le gel de l'autre. Ca rejoint un peu ce qu'a dit fxmulder, et évidemment, il ne faut pas qu'il y ait de bulles d'air entre le gel et la membrane. Les bulles sont l'ennemi numéro 1 du biologiste moléculaire/biochimiste!

Greg

[invite280504d9]

Tres bien, merci!

Donc, si je comprends bien, c'est pour uniformiser le transfert ( dans des conditions optimales ).

Merci beaucoup, j'osais pas le demander a mon superviseur, car il est assez rude quand je lui pose mes questions.

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite71f23525]

c'est surtout qu'à l'endroit où tu as une bulle, le champ électrique sera moins fort donc si tu as ta bande de protéines pile à cet endroit, elles se feront pas transférer ou alors très mal...

Greg

PS : ton superviseur abuse, c'est son rôle de répondre à tes questions!

[invitea0443c8c]

c'est surtout qu'à l'endroit où tu as une bulle, le champ électrique sera moins fort donc si tu as ta bande de protéines pile à cet endroit, elles se feront pas transférer ou alors très mal...

Ce n'est pas que le champ électrique sera moins fort c'est que l'air, de la bulle, ne conduit pas le courant contrairement au tampon de tranfert : le transfert ne se fera pas du tout là où il y a des bulles...


V.

[Yoyo]

salut

dans le cas d'un transfert semi-sec, le papiers filtres sont imbibés du tampon de tranfert. Ils servent donc de "reservoir" a tampon pour permettre le passage du courant et donc la migration des echantillons.

Dans le cas d'un transfert en liquide, le papie filtre evite d'un cote que ton gel soit directement en contacte avec les mousses, et que de l'autre ca ne soit ta membrane qui ne soit en contacte directe.
Je dirais donc que ces filtres n'ont qu'un simple role protecteur dans ce cas la. Je ne pense pas qu'ils servent a eviter les bulles, d'autant qu'ils sont souvent une source de bulle!

Yoyo

[invitea0443c8c]

dans le cas d'un transfert semi-sec, le papiers filtres sont imbibés du tampon de tranfert. Ils servent donc de "reservoir" a tampon pour permettre le passage du courant et donc la migration des echantillons.

On le fait aussi dans le cas des transferts liquides

Dans le cas d'un transfert en liquide, le papie filtre evite d'un cote que ton gel soit directement en contacte avec les mousses, et que de l'autre ca ne soit ta membrane qui ne soit en contacte directe.
Je dirais donc que ces filtres n'ont qu'un simple role protecteur dans ce cas la.

Tout à fait d'accord!

Je ne pense pas qu'ils servent a eviter les bulles, d'autant qu'ils sont souvent une source de bulle!

Indirectement si, puisque tu es obligé d'appuyer sur ton gel et sur ta membrane pour chasser les bulles, ce qui ne peut pas se faire si les whatmann ne jouent pas leur rôle d'amortisseurs et de protection...

V.