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Repiquer des bactéries...



  1. #1
    Clr

    Repiquer des bactéries...

    Bonjour,
    Je dispose de souches d'E.Coli. Je compte utiliser ces bactéries pour produire de l'hydrogène.
    Je voudrais tout d'abord les multiplier en les repiquant. Quelles sont les précautions à prendre lors de cette opération ?
    Et quelle est la composition d'un milieu minimum? C'est juste de la gélose ou y a t il un additif ?

    Merci.

    -----


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  3. #2
    Yoyo

    Re : Repiquer des bactéries...

    Salut,

    Il faut manipuler cela de maniere sterile, sinon tu vas avoir de mauvaises surprises.
    Ensuite le milieu de croissance doit contenir du glucose, des acides amines, une source d'azote, des sels.
    Mais es tu sur que tu souhaites un milieu minimum? ensuite je vois pas bien comment tu vas produire de l'hydrogene.

    Yoyo

  4. #3
    Clr

    Re : Repiquer des bactéries...

    En fait, je cherche, dans un premier temps, juste à accroître le nombres de bactéries pour constituer un "stock" utilisable dans plusieurs expériences.
    Ensuite, je compte placer des bactéries dans des milieux de compositions nutritives différentes et étudier alors la production d'hydrogène (grace à un montage approprié).

    C'est pour ça que je cherche dans quel milieu "minimum" je dois repiquer mes bactéries, uniquement pour qu'elles se multiplient.

    "le milieu de croissance doit contenir du glucose, des acides amines, une source d'azote, des sels." Y a t il des proportions à respecter?

    Merci.

  5. #4
    John78

    Re : Repiquer des bactéries...

    Salut

    Coli ne produis pas à ma connaissance d'H2, au mieux certaines souches possédant un plasmide atypique produise de faible quantité d'H2S....

    A+
    John

  6. #5
    John78

    Re : Repiquer des bactéries...

    J'ai peut etre dis une connerie :

    http://archquo.nouvelobs.com/cgi/art...setavenir.com/

    Mais il ne précise pas quel type d'hydrogène est produis... (H2 ou H2S...)

    A+
    John

  7. A voir en vidéo sur Futura
  8. #6
    Yoyo

    Re : Repiquer des bactéries...

    par contre d'apres l'article c'est lors de la fermentation anaérobique que E.coli produit de l'hydrogene.
    ces conditions ne seront certainement pas simples a mettre en place surtout hors d'un labo equipé pour la culture anaérobique.

    POur répondre a Clr, oui y'a des proportions a respecter pour faire le milieu de culture.

    Yoyo

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  10. #7
    Lord M

    Re : Repiquer des bactéries...

    L'enrichissement de E. coli peut se faire sur un milieu très simple, limite même sans milieu du tout. Pour être rigoureux je te propose la formule du bouillon nutritif de base :10g de tryptone, 5g d'extrait de viande, 5g de chlorure de sodium.

    Du peptone peut être utilisé à la plce du tryptone, et du lactose à la place du NaCl.

    En fait le vrai problème auquel tu vas te heurter va être la séléctivité de ton milieu : sur ce genre de bouillon il pousse tout et n'importe quoi. C'est pour ca qu'il faudra impérativement autoclaver ton milieu avant utilisation, et ensuite l'ensemencer et faire tes prélèvements de manière stérile (au bec bunsen par exemple).

    Bonne chance
    Lord M

    What we do in life echoes in eternity

  11. #8
    Clr

    Re : Repiquer des bactéries...

    Eh bien merci beaucoup.
    Je vais essayer de cette manière.
    Il faut que je vois aussi si je dispose de tout les systèmes pour assurer la stérilité des expériences.

    Encore merci.

    Claire

  12. #9
    Solène

    Re : Repiquer des bactéries...

    Quand à l'anaérobie, je pense qu'une simple jarre anaérobie devrait te suffir...

  13. #10
    Lord M

    Re : Repiquer des bactéries...

    Si tu as des problèmes de culture en anaérobiose, ou un manque de production de gaz, essaye avec un milieu lactosé.
    Lord M

    What we do in life echoes in eternity

  14. #11
    Meningo

    Re : Repiquer des bactéries...

    Si tu as des problèmes de culture en anaérobiose, ou un manque de production de gaz, essaye avec un milieu lactosé.
    Quel est le rapport entre l'anaérobiose et le milieu lactosé?
    Si j'ai bien compris, pour la manip, le but de l'anaérobiose est de produire du H2 : qu'est-ce que le milieu lactosé va apporter?

  15. #12
    Lord M

    Re : Repiquer des bactéries...

    Je n'en suis pas sur, mais il est possible que le lactose favorise la fermetation de E. coli, et donc le production de gaz.

    Malheureusement je n'ai pas réussi à trouver de biblio sur ce point précis. Je me base sur un catalogue de milieux de culture : le lactose revient souvent dans la composition des milieux pour E.coli. De plus pour deux d'entre eux (bouillon lactosé au BCP et bouillon BLBVB), la production de gaz est un indice de présence des coliformes.

    Ref : Biokar Diagnostics Microbiologie
    Lord M

    What we do in life echoes in eternity

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  17. #13
    Meningo

    Re : Repiquer des bactéries...

    Etrange.....pour moi E.coli fermente de nombreux sucres (glucose, sorbitol, mannose......et le lactose). Les milieux contenant du lactose ne favorisent pas la fermentation. A l'aide d'un indicateur coloré (BCP) ils permettent juste de savoir si la bactérie utilise le sucre (moyen d'identification, entre autres).

  18. #14
    Solène

    Re : Repiquer des bactéries...

    En effet dans la plupartdes milieux de culture pour Enterobactéries, le lactose est présent mais uniquement de différencier les coliformes des non coliformes. Je ne pense pas qu'il soit spélialement mieux assimilé qu'un autre sucre.
    Et le milieu BLBVB ne contient que du lactose comme substrat carboné énergétique donc difficile d'en déduire que la fermentation d'un autre sucre ne produirait pas autant de gaz...

  19. #15
    Lord M

    Re : Repiquer des bactéries...

    Ouaip, moi aussi ca me parait bizarre. Mais c'est juste un constat après avoir jeté un coup d'oeil sur les milieux de cultures disponibles. En plus ca doit dépendre de la souche utilisé.

    Enfin, n'oublions pas que c'était juste une suggestion au cas ou la production de gaz serait très faible avec un milieu classique.
    Lord M

    What we do in life echoes in eternity

  20. #16
    Meningo

    Re : Repiquer des bactéries...

    J’y avais pas pensé au départ, mais toutes les entérobactéries utilisent les sucres par voie fermentative préférentiellement, qu’elles soient placées en anaérobiose ou pas.
    Donc théoriquement on devrait obtenir de l’H2 à partir de bactéries cultivées en aérobiose.

    Ce H2 doit correspondre aux petites bulles qu’on peut observer dans les cupules des galeries api un peu vieilles (au niveau des sucres)…………à moins que ce ne soit du CO2….et là j’ai un gros doute : lors de la fermentation des sucre par les bactéries, c’est du CO2 qui est produit, non ?

    Après une petite vérif on a autant de H2 que de CO2 produits…… et pour les séparer ?????

  21. #17
    John78

    Re : Repiquer des bactéries...

    Citation Envoyé par Meningo
    Après une petite vérif on a autant de H2 que de CO2 produits…… et pour les séparer ?????

    On doit pas voir les mêmes valeurs car moi j'ai 13% de CO2 et 1% de H2 a partir de glucose...

    http://1100f.free.fr/les_fermentations.htm

    Mais bon je ne savais même pas que Coli pouvait produire du H2...

    A+
    John

  22. #18
    Meningo

    Re : Repiquer des bactéries...

    En effet...j'ai été un peu trop rapide. Je me suis arrêté sur fermentation bactérienne alors que ça ne concernait que les clostridium..

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  24. #19
    Clr

    Re : Repiquer des bactéries...

    Finalement, j'ai choisi un bouillon de Mueller-Hinton (Infusion de viande de boeuf deshydratée, hydrolysat de caséine, amidon). ça convient bien car le bouillon est troublé. De plus, il y a un dégagement gazeux.
    Maintenant, je dois faire un milieu pour étudier des Chlamydomonas. C'est un milieu TAP (Tris Acetate Phosphate). J'ai la "recette" mais savez-vous ce que sont des oligo-éléments Hutner et si on peut en trouver tout prêt? (ça me derait gagner du temps)
    Voilà.

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