le séquençage??? une petite question

[invite413c1d4c]

Bonjour à tous

J'ai un petit problème de connaitre une chose dans La technique de séquençage; si Vous pouvez m'aider
donc...
vous savez que le séquençage de l'ADN consiste à déterminer l'ordre d'enchaînement des nucléotides d’un fragment d’ADN donné.

une ADN polymérase synthétise le brin complémentaire de l'ADN à séquencer. Dans le milieu de réaction se trouvent des dNTP en grand nombre, et une faible proportion d'un ddNTP (à Adénine, ou Guanine, ou Thymine, ou Cytosine). A un moment totalement aléatoire, un ddNTP sera ajouté à la chaîne en cours de synthèse par l'ADN polymérase. Cette synthèse s'arrêtera donc à cet endroit.

Par exemple, si le milieu réactionnel contient une faible proportion de didésoxyribonucléotide à Guanine (ddGTP), on obtiendra à la fin des réactions un ensemble de brins d'ADN de tailles variés, selon l'endroit où un ddGTP se sera inséré et que la réaction aura ainsi été stoppée (ce qui correpond, du fait de la complémentarité des bases, à la présence d'une Cytosine dans le brin d'ADN séquencé). On répète la même opération avec un milieu contenant du ddATP, un milieu contenant du ddCTP, et un milieu contenant du ddTTP.

mais les questions que se posent la:
on a une seul brin d'adn : comment la polumérase fait des copier a partire d'un seul brin d'adn?
et en plus: une fois que la premiere polémirisation fait; donc on obtient une seul fragment ...apartire de ça ou se fait les autre fragment que en va séparer par l'ectrophorese??

et a la fin s'il y'a un védio ou animation de la téchnique de séquençage pour plus comprendre!!!
et merci pour vous a l'avance
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[invite72953e70]

Bonjour à tous

J'ai un petit problème de connaitre une chose dans La technique de séquençage; si Vous pouvez m'aider
donc...
vous savez que le séquençage de l'ADN consiste à déterminer l'ordre d'enchaînement des nucléotides d’un fragment d’ADN donné.

une ADN polymérase synthétise le brin complémentaire de l'ADN à séquencer. Dans le milieu de réaction se trouvent des dNTP en grand nombre, et une faible proportion d'un ddNTP (à Adénine, ou Guanine, ou Thymine, ou Cytosine). A un moment totalement aléatoire, un ddNTP sera ajouté à la chaîne en cours de synthèse par l'ADN polymérase. Cette synthèse s'arrêtera donc à cet endroit.

Par exemple, si le milieu réactionnel contient une faible proportion de didésoxyribonucléotide à Guanine (ddGTP), on obtiendra à la fin des réactions un ensemble de brins d'ADN de tailles variés, selon l'endroit où un ddGTP se sera inséré et que la réaction aura ainsi été stoppée (ce qui correpond, du fait de la complémentarité des bases, à la présence d'une Cytosine dans le brin d'ADN séquencé). On répète la même opération avec un milieu contenant du ddATP, un milieu contenant du ddCTP, et un milieu contenant du ddTTP.

mais les questions que se posent la:
on a une seul brin d'adn : comment la polumérase fait des copier a partire d'un seul brin d'adn?

Tu pars d'un produit d'amplification par PCR du fragment que tu veux séquençer et tu ajoutes une amorce (dans le bon sens STP) pour demarrer la reaction !

et en plus: une fois que la premiere polémirisation fait; donc on obtient une seul fragment ...apartire de ça ou se fait les autre fragment que en va séparer par l'ectrophorese??

Même réponse, je pense que ton interrogation vient du fait que tu négliges le fait que la réaction ne se fait pas sur un fragment d'ADN, mais sur plusieurs millions !

et a la fin s'il y'a un védio ou animation de la téchnique de séquençage pour plus comprendre!!!
et merci pour vous a l'avance

Peut-être là, mais tu doit pouvoir trouver mieux.

http://www.snv.jussieu.fr/vie/dossie...e/sequence.htm

[invite413c1d4c]

merci pour ta réponce
done dans le mélange on utilise pas uniquement d'une seul copie de fragment d'adn par contre plusieur copié transcrit par le pcr (amplifier)
et lorsque la selection des base azotique est aléatoire on obtient a la fin des fragments de déférent taille

[invitee863e61a]

merci pour ta réponce
done dans le mélange on utilise pas uniquement d'une seul copie de fragment d'adn par contre plusieur copié transcrit par le pcr (amplifier)
et lorsque la selection des base azotique est aléatoire on obtient a la fin des fragments de déférent taille

de toute façon, une même molécule d'ADN peut être copié plusieurs fois! Il s'agit d'une matrice à partir de laquelle plusieurs élongations sont possibles.

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite72953e70]

Théoriquement d'accord avec toi, mais en pratique je ne pense pas que çà marche très bien sur molécule ~ unique. Au final tu aura beaucoup de bruit de fond
Etienne