Bonjour,
J'ai une question concernant le développement actuel de vecteurs plus sécurisés pour la thérapie génique, tels que les vecteurs SIn délétés en U3 je crois. Ces vecteurs sont justes cités dans mon cours mais j'aimerais comprendre plus précisément le mécanisme par lequel ces vecteurs sont plus surs, et s'il existe d'autres types de vecteurs plus sécurisés.
Merci!
Pas de réponse à ma question?... siou plait!....
Désolée d'insister... mais pas de connaisseurs de ce domaine dans les parages?.... merci!!!
Bonjour !
Je vais essayer de donner quelques bouts de réponse, en espérant ne pas me tromper.
Les vecteurs de thérapie génique SIN dérivent des rétrovirus. La séquence de départ est donc :
U3-R-U5-psi-Gag-Pol-Env-U3-R-U5
Pour la plupart des vecteurs, la partie codant pour les protéines virales sera délétée et remplacée par le gène d’intérêt.
U3-R-U5-psi-YFG (your favorite gene) -U3-R-U5
Une cellule portant cette séquence ne pourrait pas produire de nouvelles particules, ne possédant pas de protéines virales. Il faut donc fournir à la cellule « productrice » aussi les gènes des protéines. Mais dans ce cas, les risques de recombinaison, reconstruisant un virus fonctionnel, sont loin d’être nuls. Un des moyens pour éviter cela consiste à déléter la séquence U3 en LTR3’, ce qui donne, dans la cellule productrice :
U3-R-U5-psi-YFG-Δ-R-U5
La transcription de cette séquence donne :
1) YFG-Δ-R (le YFG porte un promoteur approprié) et
2) R-U5-psi-YFG-Δ-R
La deuxième séquence donnera, après la reverse transcription,
Δ-R-U5-psi-YFG-Δ-R-U5
Celle-ci sera utilisée pour la thérapie génique, et dans la cellule cible, le seul produit possible sera
YFG-Δ-R
Voilà, comme ça, le virus ne se reconstituera pas !
En fait, je crois que c’est sur la séquence transcomplémentante que se fait la plus grande partie des travaux. C’est la séquence qui sert à produire les protéines virales, dans la cellule productrice.
La première génération était juste délétée de psi, ce qui empêchait en théorie le packaging de la séquence...
La deuxième portait en plus une queue polyA à la place de LTR3’
Pour la troisième, on a séparé les gènes des protéines. Une séquence porte
U3-R-U5-Gag-Pol-Env-néo-PolyA
l’autre
U3-R-U5-phléo-Env-PolyA
(phléo et néo, gènes de résistance, à phléo- et néomycine)
Enfin pour la quatrième génération, les séquences LTR5’ ont été remplacées par des promoteurs.
J'espère ne pas avoir dit de bêtises...
Merci beaucoup
