precipitation ADN
Bonjour a tous,
Dans mon protocole pour precipiter de l ADN, on me dit de precipiter a froid avec NaCl et ethanol100 puis apres centri tout ça, de rincer avec de l ethanol70....et je suis pas sure de savoir a quoi ça sert, et pourquoi pas de l ethanol100?
merci
Salut a toi,
de ce que je sais le lavage à l'ethanol 70% permet de dissoudre les sels présents dans ton culot. Mais je ne sais pas si il y a une autre utilité...
Bonne soirée
l'ADN précipite dans l'ethanol 70% en présence de sel (NaCl 200mM)
Ce qui doit être écrit dans votre protocole c'est que l'on reprend un volume V d'ADN dans 2V d'éthanol absolu non? Si l'on fait le calcul, la concentration finale en ethanol est ~70%
Le second lavage permet de bien éliminer les sels
Donc dans les faits on ne met jamais de l'ethanol 100% sur l'ADN. L'éthanol 100% deshydrate de trop votre ADN et l'abime
Cordialement,
piwi
Je sers la science et c'est ma joie.... Il parait.
Merci à vous deux!
Piwi, dans le protocole on me dit de rajouter 2V d ethanol100 avec du sel, puis le rinçage avec 1mL d ethanol70....donc voilà!! lol, jme suis demandé a quoi ça sert de changer le degré d ethanol
Yes!
Vous avez vu, je suis devin.
Plus serieusement il y a plein de personnes qui ne voient pas ce point là non plus. Rassurez vous, vous n'etiez pas seule.
Mais quand même, je suis tellement bon que je m'applaudis tiens!
Cordialement,
piwi
Je sers la science et c'est ma joie.... Il parait.
Ouuuéééé, bravo!!!! et merci
Bon du moment que je suis pas la seule, c est pas cette fois-ci que je porterai bien mon pseudo
Merci, bonne soirée
allez j'applaudis aussi
J'avais jamais réfléchi à pourquoi 2 volume d'EtOH... mais alors la qualité de précipitation est elle très influencée par le pourcentage en EtOH ? 70% final est ce le min, le max ou une valeur intermédiaire pour être tranquille?
70% c'est la valeur qui permet de précipiter l'ADN sans le deshydrater de trop de sorte que l'on pourra le réhydrater facilement (reprise du culot dans le TE ou dans l'eau). Ca n'est pas extremement rigoureux à mon avis (d'ailleurs on dit 70% alors que 2V feront 66%~65%). C'est un taux d'alcool sans risque disons.
Cordialement,
piwi
Je sers la science et c'est ma joie.... Il parait.
moi dans mes protocoles c'est 1/10 du volume avec du NaCl 3M et 3 volumes d'ethanol 100%.
Mais sinon Piwi a tout dit
YOyo
