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phenomene de Conjugaison




  1. #1
    lydiaa

    phenomene de Conjugaison

    salut,
    est-ce que quelqu'un pourait me donner une bref explication sur la methode de selection et indicateur de couleur?
    je sais que la selection fait introduire un gene specifique dans une cellule, mais l'indicateur de couleur permet de voir les colonies qui sont devenues resistants apres la conjugaison. (mais je ne suis pas trop sur !!!)

    merci d'avance.

    -----


  2. Publicité
  3. #2
    MaliciaR

    Re : phenomene de Conjugaison

    Citation Envoyé par lydiaa Voir le message
    salut,
    est-ce que quelqu'un pourait me donner une bref explication sur la methode de selection et indicateur de couleur?
    je sais que la selection fait introduire un gene specifique dans une cellule, mais l'indicateur de couleur permet de voir les colonies qui sont devenues resistants apres la conjugaison. (mais je ne suis pas trop sur !!!)

    merci d'avance.
    Oulà, tu parles de plein de choses différentes!
    La sélection ne fait pas introduire un gène dans un gène spécifique dans une cellule, tu fais une sélection par criblage pour savoir si ton gène d'intérêt est dans une cellule...
    Puis, entre un gène rapporteur qui colore et un gène de résistance, il y a une très grande différence!

    Peux-tu préciser ton niveau d'études, stp?

    Cordialement,
    An expert is one who knows more and more about less and less.

  4. #3
    lydiaa

    Re : phenomene de Conjugaison

    on a etudie la conjugaison et la transposition chez *coli* en utilisant la streptomycine, kanamycine et ampicilline.
    1) donneuse est : F+ Lac+ Ap+ Km+ Sm-
    2) receveuse est : F- lac- Ap- Km- Sm+

    - on a ajoute la solution donneuse a la solution receveuse ( dilue dans une solution A (1:10) et on a étalé sur une plague d'agar L+Sm+Ap+Km

    pour la deuxieme plaque on a dilué (1:10000) et on a étalé sur la plaque qui contient L+Sm+Ap

    troisieme, dilué(1:100000) et étalé sur une plaque : L+Sm+IPTG(inducteur)+X-gal (indicateur de couleur) *** sur cette plaque on a obtenue des colonie blanche et bleues.& y avait plus de colonies que les autres plaques.

    j'ai essayé de résumer! j'espere que c'est clair.
    merci!


  5. #4
    MaliciaR

    Re : phenomene de Conjugaison

    J'ai bien lu ce que tu as écrit, mais je ne vois nulle part de question posée...
    Donc, tes données brutes sont là, et ensuite?

    Cordialement,
    An expert is one who knows more and more about less and less.

  6. #5
    lydiaa

    Re : phenomene de Conjugaison

    la question est c'est quoi la selection? quel est le lien avec ces anthibiotiques?

  7. A voir en vidéo sur Futura
  8. #6
    t0yt0y

    Re : phenomene de Conjugaison

    Citation Envoyé par lydiaa Voir le message
    on a etudie la conjugaison et la transposition chez *coli* en utilisant la streptomycine, kanamycine et ampicilline.
    1) donneuse est : F+ Lac+ Ap+ Km+ Sm-
    2) receveuse est : F- lac- Ap- Km- Sm+

    - on a ajoute la solution donneuse a la solution receveuse ( dilue dans une solution A (1:10) et on a étalé sur une plague d'agar L+Sm+Ap+Km

    pour la deuxieme plaque on a dilué (1:10000) et on a étalé sur la plaque qui contient L+Sm+Ap

    troisieme, dilué(1:100000) et étalé sur une plaque : L+Sm+IPTG(inducteur)+X-gal (indicateur de couleur) *** sur cette plaque on a obtenue des colonie blanche et bleues.& y avait plus de colonies que les autres plaques.

    j'ai essayé de résumer! j'espere que c'est clair.
    merci!

    Okay, la si tu a compris que la conjugaison était la transmission du facteur F de la souche donneuse à la souche récéptrice, c'est tout gagné ; à l'issue de la conjugaison, ta souche receptrice à un génotype initiale qui est celui di départ ( lac-, ap-, etc ) et présente maintenant de nouvelles particularité apportées par le facteur F, que je supposerais etre les caractéristiques lac+, Ap+, Km+, Sm -.

    Tu va donc pouvoir séléctionner ces bactéries dites conjugués sur un milieu contenant de l'am, km ou sm, puisqu'elle présentera toute les résistances ( il est vrai qu'il aurait fallu avoir des précisions sur le facteur F.

    Concernant l'indicateur Xgal, ceci est lié à l'opéron lactose lac.
    Un bactérie lac+ peut en présence d'inducteur ( IPTG ) utiliser le Xgal et l'hydrolyser grace à une enzyme, la béta galactosidase, qui à l'issue de l'hydrolyse, donne des produits dont un qui confère la couleur bleue. Une bactérie lac- ne pourra utiliser le Xgal et sera de couleur blanche.

    Si tu d'autres questions, n'hésite pas, je sors d'un TP sur quatre jours concernant la transformation, la conjugaison et la transposition.

  9. #7
    MaliciaR

    Re : phenomene de Conjugaison

    Citation Envoyé par lydiaa Voir le message
    on a etudie la conjugaison et la transposition chez *coli* en utilisant la streptomycine, kanamycine et ampicilline.
    1) donneuse est : F+ Lac+ Ap+ Km+ Sm-
    2) receveuse est : F- lac- Ap- Km- Sm+
    Vaut mieux rajouter (après le souligné) "comme marqueurs de sélection"...

    - on a ajoute la solution donneuse a la solution receveuse ( dilue dans une solution A (1:10) et on a étalé sur une plague d'agar L+Sm+Ap+Km
    C'est quoi, cette solution donneuse ou receveuse? Tu as une culture contenant une souche donneuse et une autre contenant une souche receveuse!
    Et quel est le but de cette manip?

    pour la deuxieme plaque on a dilué (1:10000) et on a étalé sur la plaque qui contient L+Sm+Ap
    Même question : quel est le but de cette manip?

    troisieme, dilué(1:100000) et étalé sur une plaque : L+Sm+IPTG(inducteur)+X-gal (indicateur de couleur) *** sur cette plaque on a obtenue des colonie blanche et bleues.& y avait plus de colonies que les autres plaques.
    Pourquoi on a fait tout ça? Et quelle est la signification des colonies blanches et des colonies bleues?

    Citation Envoyé par lydiaa Voir le message
    la question est c'est quoi la selection? quel est le lien avec ces anthibiotiques?
    Tu m'excuseras mais personne n'est censé deviner ta question

    Citation Envoyé par t0yt0y Voir le message
    Okay, la si tu a compris que la conjugaison était la transmission du facteur F de la souche donneuse à la souche récéptrice, c'est tout gagné ;
    Beh vois-tu, faut t'exprimer un peu mieux... La conjugaison est le processus d'établissement d'un pont cytoplasmique entre deux bactéries, par le biais duquel il peut y avoir un échange horizontal entre deux bactéries, durant lequel le facteur F possédé par la souche F+ subira une transmission réplicative à la souche F-...

    à l'issue de la conjugaison, ta souche receptrice à un génotype initiale qui est celui di départ ( lac-, ap-, etc ) et présente maintenant de nouvelles particularité apportées par le facteur F, que je supposerais etre les caractéristiques lac+, Ap+, Km+, Sm -.
    Pareil, de la rigueur! Ca veut dire quoi, ta souche de départ aura le même génotype mais modifié? Il sera le même ou modifié?
    Non, la souche réceptrice aura acquis de nouveaux gènes (on l'espère). Ici, visiblement on cherche à savoir si les propriétés "production de béta-gal", AmpR et KanaR seront transmises par ce biais, càd si le gènes LacZ, "résistance à Amp" et "résistance à Kana" seront transmis durant la conjugaison...

    Tu va donc pouvoir séléctionner ces bactéries dites conjugués sur un milieu contenant de l'am, km ou sm, puisqu'elle présentera toute les résistances ( il est vrai qu'il aurait fallu avoir des précisions sur le facteur F.
    Visiblement, c'est que le facteur F porte tous ces gènes...

    Concernant l'indicateur Xgal, ceci est lié à l'opéron lactose lac.
    Un bactérie lac+ peut en présence d'inducteur ( IPTG ) utiliser le Xgal et l'hydrolyser grace à une enzyme, la béta galactosidase, qui à l'issue de l'hydrolyse, donne des produits dont un qui confère la couleur bleue. Une bactérie lac- ne pourra utiliser le Xgal et sera de couleur blanche.
    Je ne pense pas qu'il s'agisse de l'opéron Lac entier, mais juste de LacZ.
    Ensuite, l'induction par IPTG doit avoir été expliquée à la demoiselle, ainsi que le substrat chromogène X-gal... Faut aussi lire son cours parfois, ça fait pas de mal...

    Par ailleurs, t0yt0y, ce n'est pas super formateur de filer des réponses toutes faites... Il vaut mieux aiguiller les gens et leur donner matière à réflexion, plutôt que leur servir les choses toutes prêtes.

    Cordialement,
    An expert is one who knows more and more about less and less.

  10. Publicité
  11. #8
    lydiaa

    Re : phenomene de Conjugaison

    alors la couleur bleu indique tout simplement qu'il y eu le transfert de l'operon lac!

    merci bcppp pour vs reponses!!! si c'etait tres bien explique ds les notes je ne serai pas venue ici! ...c'etait pas claire surtout quand c'est des choses qu'on voit pour la premiere fois!
    merci encore une fois

  12. #9
    t0yt0y

    Re : phenomene de Conjugaison

    Excuse moi malicia d'avoir, à une question, apporté une réponse, qui apparement avait du mal à sortir de tes posts sauf en réplique à la limite de l'agression.

    La réflexion par soi même est une bonne chose en effet, mais les réponses toutes faites ne sont pas mal formatrices aussi, surtout en biologie ou tout est compréhension et apprentissage. En tout cas je sais qu'il m'arrive de fonctionner ainsi dans mon apprentissage.
    Si notre amie avait voulu se confronter à un raisonnement et une réflexion, elle aurait surement fait appel au bete noire que représente parfois les professeurs pour qui on a souvent l'impression qu'ils se font cier en enseignement.
    Je n'ai peut etre pas ton niveau, d'étude et de posts, mais je sais que dans une détresse pareille, j'aurais aimé une réponse claire et précise, et pas de tiraillement.

    Amicalement ( et oui c'est possible )

  13. #10
    MaliciaR

    Re : phenomene de Conjugaison

    Merci pour la leçon de morale.
    Une question n'est pas une source de détresse sauf s'il n'y a pas d'efforts derrière... Je suis désolée, mais la manière dont on écrit est la manière dont on pense : si quelqu'un n'arrive pas à se faire comprendre en écrivant, c'est qu'il est totalement confus... Ce n'est pas très intéressant de lui dire les choses toutes faites sauf si c'est pour que ce soit écrit dans un compte rendu pour le lendemain, mais c'est plus intéressant et formateur de lui poser des questions sur ce qui ne va pas.
    Mais ensuite, c'est mon avis personnel, je ne demande à personne de le soutenir/partager. Je te remercie tout de même de comprendre qu'une certaine sècheresse (je n'ai nulle part vu de l'agression) a ses raisons, explicitées par ailleurs. Et de comprendre également que si je m'en moquais totalement de ce que fera la demoiselle, je n'aurais même pas répondu... Ce forum est un endroit d'échange, il faut que les gens le comprennent et arrêtent de penser qu'il y a une institution "solutions d'exos" ici.

    Cordialement,
    An expert is one who knows more and more about less and less.

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