bonjour,
lorsque l'on étudie l'effet d'une substance sur la croissance de cellules de cancer de sein quel protocole doit on faire, dans quel milieu de culture doivent être mises les cellules? et quelles methodes d'analyse de la croissance des cellules va t-on utiliser, celles qui seront les plus pratiques et les moins couteuses, merci beaucoup.
personne ne peut m'aider??
Je voulais juste savoir se que l'on doit mettre dans un milieu de culture hormis le milieu essentiel pour la culture des cellules mcf7 par exemple et lorsqu'on étudie la croissance des cellules mcf7 en présence d'un composé quelles sont les méthodes appropriées pour voir si les cellules prolifèrent ou meurent
merci beaucoup
Je ne suis pas un spécialiste de cette cellule mais je pense qu'elle devrait bien pousser dans un milieu classique style DMEM supplémenté avec 5% ou 10% de sérum foetal bovin et un peu de peni/strepto. Selon les cas, il faudrait penser à rajouter un peu de glutamine, sans oublier l'HEPES.
Pour ce qui est de la prolifération, j'ai vu des papiers récents où on faisait encore du cristal violet, sinon il y a les kits qui mesurent le coté métabolique (genre MTT/XTT que je déconseille) ou la synthèse d'ADN (genre incorporation de BrDU qui est simple et efficace tout comme l'incorporation de la thymidine tritiée qui nécessite de travailler plus proprement....)
merci beaucoup glast pour tout ces renseignement mais qu'est ce que l'HEPES et pourquoi mettre de la glutamine?
ah oui et on met de la brdu pour faire une cytométrie de flux??
La glutamine est un constituant essentiel des protéines et la plupart des flacons DMEM qu'on trouve dans le commerce n'ont pas de glutamine (car très/trop sensible aux variations de T°C). Il faut juste le rajouter quand tu prépares le milieu de culture.
L'HEPES, lui, permet de tamponner et maintenir le pH cellulaire. Certain disent qu'il serait plus efficace que le bicarbonate. Je n'ai jamais remarqué une grande différence. Quand j'utilise des préparations cellulaires en incubateur avec 5% CO2, j'utilise le bicarbonate. Quand, j'utilise des préparations qui vont rester longtemps hors de l'incubateur, j'utilise de l'HEPES. A toi de voir.
Pour le Brdu c'est une détection colorimétrique de type ELISA.
ok je comprend merci beaucoup pour ton aide
