electrophorèse

[invited0d4c901]

bonjour

Pourquoi faut il utiliser le rouge ponceau dans une séparation électrophorétique des proteines sériques ?


-----

[piwi]

On utilise pas le rouge ponceau pour séparer les protéines mais pour les voir dans le gel après la migration.

Cordialement,
piwi

[invitea0443c8c]

On utilise pas le rouge ponceau pour séparer les protéines mais pour les voir dans le gel après la migration.

Cordialement,
piwi

Sur la membrane plutôt
Les gels se colorent essentiellement au bleu coloïdal...

V.

[piwi]

Oui le gel ou la membrane (ca marche aussi sur gel, j'ai deja essayé). Mais c'est absolument vrai que les textbook préferent le bleu de coomassie. Personnellement je te rejoins, je préfere aussi le bleu coloidal.

Quoi qu'il en soit, le rouge ponceau est une coloration labile juste pour voir avant de faire un autre traitement alors que les autres colorants que nous venons de discuter sont définitifs et exclus dans le cadre d'un westernblot.

Cordialement,
piwi

[A voir en vidéo sur Futura]

[invitea0443c8c]

Oui le gel ou la membrane (ca marche aussi sur gel, j'ai deja essayé). Mais c'est absolument vrai que les textbook préferent le bleu de coomassie. Personnellement je te rejoins, je préfere aussi le bleu coloidal.

Ha ok je ne savais pas! Je n'ai jamais essayé! Merci du tuyau...

Quoi qu'il en soit, le rouge ponceau est une coloration labile juste pour voir avant de faire un autre traitement alors que les autres colorants que nous venons de discuter sont définitifs et exclus dans le cadre d'un westernblot.

Non en fait tu peux enlever le bleu colloïdal en chauffant ton gel (assez longtemps au micro-onde) mais effectivement tu ne peux pas repasser en western derrière
Mais d'ailleurs, j'avoue que je ne sais pas exactement comment fonctionne le rouge Ponceau, et je crois que c'est assez consensuel. J'ai demandé à un collègue biochimiste des protéines et il semble que ce ne soit pas vraiment définit...

V.

[piwi]

Personnellement je le laisse 1/2h dans le rouge puis je rince doucement d'abord à l'acide acétique pour enlever le gros puis ensuite doucement à l'eau. Les bandes apparaissent progressivement puis, après une phase où elles sont assez nettes, elles disparaissent. Si tu veux les virer rapidement, tu rinces tout le temps à l'acide acétique puis quand même un peu à l'eau tout à la fin.
Je ne crois pas non plus qu'il existe un protocole clair et net. C'est ma cuisine personnelle quoi.

Sinon pour le gel bouilli je te fais confiance. Je vais pas essayer

piwi