bon soir,
voila j'ai quelque questions sur l' éléctrophorèse d'ADN sur gel d'agarose,
avant de déposer l'ADN dans les puits:
1)pourquoi on doit mettre ADN à 65°C/qlq mn puis le faire passer à la glace?
2)est ce qu'on doit centrifuger le melange ADN+bleu de bromophenol et pourquoi?
merci en avance.
1)pourquoi on doit mettre ADN à 65°C/qlq mn puis le faire passer à la glace?
2)est ce qu'on doit centrifuger le melange ADN+bleu de bromophenol et pourquoi?
Pour la 1 je n'ai jamais fais ça et je me demande à quoi ça pourrait bien servir...
Pour la 2 ça ne sert qu'a bien tout faire tomber au fond du tube histoire de tout récupérer.
Je sers la science et c'est ma joie.... Il parait.
1- On fait cela pour les ARN, pour éviter que le gel ne présente des formes structurées des ARN et non les formes linéaires que l'on recherche pour déterminer la taille de chaque bande. Sans dénaturer, le profil de migration ressemble pratiquement à un marqueur de PM
Pour les ADN, pas de souci car ils ont beaucoup moins tendance à se structurer ainsi in vitro (dans ton tube).
Ceci dit, il est possible que tu es fait migrer des produits de digestion: dans ce cas, l'incubation à 65°C était destiné à inactiver l'enzyme de restriction, pour éviter qu'elle ne continue de couper (spécifiquement puis beaucoup moins) le temps de la migration.
2- Le bleu de dépôt contient du bleu de bromophénol (un colorant qui permet de suivre l'avancée de la migration) et de quoi rendre ton ADN plus "lourd" pour qu'il rentre plus facilement dans ton puit (sinon, il ne tombe pas quand tu déposes, et c'est relou)
Bonjour,
Il s'agit d'une digestion, non? Je sais qu'on peut faire ça pour inactiver les enzymes (encore meilleur, 10 min à 80°C).Envoyé par mia12
Cordialement,
merci pour la reponse,
j'ai trouvé qu'on doit mettre ADN à 65°C/qlq mn pour rendre le linéaires et la glace sert à garder cette forme,
et j'ai poser la question pour savoir est ce que c'est juste ou non.
Peux-tu écrire quelque chose de compréhensible?
Cordialement,
Je ne crois pas que cela suffise à linéariser une molécule circulaire, tu sais. Et pour les molécules linéaires, comme leur non l'indique, elle n'ont pas besoin de cela non plus
MERCI,j'ai bien compris1- On fait cela pour les ARN, pour éviter que le gel ne présente des formes structurées des ARN et non les formes linéaires que l'on recherche pour déterminer la taille de chaque bande. Sans dénaturer, le profil de migration ressemble pratiquement à un marqueur de PM
Pour les ADN, pas de souci car ils ont beaucoup moins tendance à se structurer ainsi in vitro (dans ton tube).
Ceci dit, il est possible que tu es fait migrer des produits de digestion: dans ce cas, l'incubation à 65°C était destiné à inactiver l'enzyme de restriction, pour éviter qu'elle ne continue de couper (spécifiquement puis beaucoup moins) le temps de la migration.
2- Le bleu de dépôt contient du bleu de bromophénol (un colorant qui permet de suivre l'avancée de la migration) et de quoi rendre ton ADN plus "lourd" pour qu'il rentre plus facilement dans ton puit (sinon, il ne tombe pas quand tu déposes, et c'est relou
attention, tu as bien vu qu'on ne le fait pas en principe pour les ADN! C'était pour quoi dans ton cas?MERCI,j'ai bien compris
oui,j'ai compris ça.
