Bonjour,
je vais bientot faire une overlappe PCR pour fusionner une séquence leader, une chaine légére d'anticorp et une chaine lourde. On a donc designé spécifiquement des primers que j'ai recu aujourd'hui. J'ai donc commencé par faire une PCR indépendante pour chacune des séquences. J'ai donc obtenu dans trois tubes différents mes produits de PCR. Ensuite j'ai fais un gel pour voir si j'avais amplifié spécifiquement, ce qui été le cas. Ensuite mon chef m'a demandé de purifier les séquences directement à partir du gel pour pouvoir ensuite les mélanger ensemble et ainsi faire l'overllape PCR. Vu que je sais que j'ai amplifié spécifiquement, n'était-il pas possible de centrifuger mes tubes contenant mes produits de PCR, pour avoir un culot correspondant aux séquences amplifiées, enlever le surnageant puis reprendre le culot dans quelques microlitres de tampon et enfin prendre quelques microlitres de chaque produits de PCR et les mélanger ensemble pour faire mon Ovelappe PCR??
Avis aux habitués des ce type de manip. Y'a t'il une raison concréte pour avoir récupéré l'ADN directement à partir du gel? Est-il possible de faire comme j'ai dis?
Merci pour vos réponses
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