Bonjour,
Quelqu'un pourrait-il m'aider SVP?!!!Je cherche, je cherche mais je ne trouve pas!
Comment feriez-vous pour identifier un gène à partir d'une protéine purifiée??
Et aussi, une protéine qui a un pic d'absorption a 410nm présente une couleur rouge sur un gel SDS-PAGE dès la fin de l'électrophorèse, avant même coloration par le bleu de Coomassie..
A quoi cela pourrait-il être dû?
Un grand merci pour vos réponses
Bonjour,
Je pense que si tu séquences ta protéine, tu dois pouvoir à partir de site internet et de banque de données trouver la séquence nucléotidique.
C'est parti pour un séquençage ...
Salut,
pour la couleur rouge?
surement la presence d'hèmes métaliques?
Pour l'identification du gène à partir de la protéine deux cas de figure se presentent :
i/ le génome de ton oganisme est séquencé, et au quel cas un simple séquençage N-terminal couplé à un BLAST pourra de donner le gène correspondant.
ii/ ton génome est inconnu, alors là il faut réaliser une digestion trypsique, séparer les peptides, les transferer sur membrane et réaliser sur ceux-ci des séquençages N-terminaux .
Grace aux différentes séquences peptidiques séquencées, tu pourra dessiner des oligonucléotides dégénérés et amplifier par PCR des portions de ton gène d'interet. Le reste de la séquence sera complétée par PCR inverse.
Voilà ce que je ferais...
La question est : "Est ce un TP ou non ?"
Car si c'est pas un TP, un petit séquençage protéique, ou une analyse en spec de masse et le tour est joué.
Si c'est un TP, alors faut voir les infos dont tu disposes :
SDS-PAGE => poids en conditions dénaturantes
couleur rouge => protéine naturellement colorée = pigment ? cycle...
Absorbance 410nm
Peut être y a-t-il possibilité de faire d'autres analyses : gel d'isofocalisation pour déterminer le pI, clivages par des protéases, fluorescence de la protéine ?
Bonjour!!
Ce n'est pas un TP malheureusement...
Merci beaucoup pour vos reponses qui m'aident beaucoup!!
