Bonjour,
J'aimerais connaitre l'utilité de l'élongation terminale en PCR (10 minutes généralement). Que se passe t'il pendant cette phase sachant qu'un élongation est effectuée normalement à chaque cycle. Est elle insuffisante?
De meme on m'impose une phase 'd'activation' à 92°C pendant 5 min à elleeune utilité ?
Merci
Salut,
10 min en fin de PCR ca te permet de completer toutes les elongations et selon le cas de soit rajouter tes A si tu utilises du T cloning, soit de les enlever si tu utilises une enzyme proofreading.
Generalement l'activation a 92 deg c'est pour activer l'enzyme qui est soit bloquee par un Ac soit par un traitement chimique. L'enzyme est inactive pour eviter que ta reaction commence lors de la preparation du mix.
A+
salut
pareil pour Gorben a propos de l'activation de ton enzyme. En revanche pour l'élongation terminale c'est un vestige de l'epoque ou les taq marchaient mal et qu'elles polymerisaient quand elles en avaient le temps!
je ne le fait plus jamais et ca ne pose aucun probleme. Maintenant ca ne te fait gagner que 10mn...
YOyo
Merci pour beaucoup pour vos réponses !
