Bonjour
J'ai un petit problème en TP de biochimie sur l''influence du pH au cours de l'activité des phosphatase alcalines.
Il demande de calculer en UI/L l'activité phosphatase alcalines du sérum avec la formule: Activité( en UI/L d'enzyme) = v * DI
avec v en UI/L et DI dilution de l'enzymz dans le milieu d'incubation
Mais que est v???
auparavant il nous demander de tracer la courbe DO=f(PNP) et la courbe DO=f(PH)
Merci d'avance
Salut,Envoyé par luccio37
Généralement v est la vitesse de réaction en UI et pas en UI/L (normalement).
Les UI sont des micromole de substrat consommé par minute (à vérifier quand même). On peut dire que c'est représentatif d'une quantité d'enzyme. Donc ton activité en UI/L est représentatif d'une concentration d'enzyme.
ils ont fait comme ça (ça change pas grand chose au finale), donc pour calculer ton activité finale du sérum tu doit trouver l'activité de ton essai et prendre en compte le facteur de dilution du à la manipulation. (d'ou ta formule Activité = v * DI).
A ton avis pourquoi t'ont-ils demandé de tracer ces courbes? (tu dois en déduire quelque chose par un calcule mais quoi?)
Il demande de calculer l'activité à chaque pH
Avec les deux courbes, on peut savoir quelle est pour chaque pH la concentration en PNP
Mais après je ne sais pas
La phosphatase alcaline catalyse la réaction de transformation de PNPP en PNP (je suppose que c'est ca ta réaction?).
Donc si tu as ta concentration de départ en PNP et finale et que tu sais combien de temps il y a entre ces deux points tu peux déterminer la vitesse de ton enzyme. Tu me suis?
Vous avez arrêté la réaction a un temps donné non?
On a arreté la réaction à 15 minutes
On a pas la concentration finale en PNP
La courbe DO=f(PNP) est la gamme d'étalonnage, on y a mis du PNP et du tampon
Et la DO elle t'indique bien quelque chose. C'est une DO de quoi? et ton coefficient d'extinction molaire?
Tu cherche ou je fais tout a ta place?
La DO correspond à la quantité de produit formé
je prendrais la DO en fonction du pH et je la reporterais sur la courbe d'étalonnage comme ca je pourrais savoir combien de PNP a été formé en 15 minutes donc savoir la vitesse de l'enzyme
après il faut multiplier par la dilution de l'enzyme et on a l'activité
C'est ca ou pas?
merci pour toutes les réponses
Voila,
Tu prend une DO à un pH donné sur ta courbe (par exemple ta DO max). Ensuite tu regarde à quel quantité de PNP formé cela correspond.
Après ça tu peux déterminer ta vitesse en divisant par ton temps d'incubation. Pour ton activité tu redivise par ton volume réactionnel puis tu applique le facteur de dilution.
Bien sur tu peux condensé ça e une formule ce qui sera peut être plus clair (suivant comme tu réfléchis).
Merci pour tout
peut être à bientot
