De l'ADNc simple brin à la ligation? ??

[inviteea23feb0]

bonsoir a tous
je travaille sur des organismes eucaryotes; j'ai fait une extraction d'ARN, une reverse transcription et maintenant j'ai de l'ADNc simple brin ; ma question est la suivante : pourrait je directement faire une PCR sur cet ADNc simple brin afin de le cloner dans un vecteur (il est à savoir que les sequences nucleotidiques sont deja publiées...) autrement dit est ce que une PCR peut se faire sur de l'ADN simple brin (faire une PCR directement sans passer par la RT PCR)

Merci d'avance...
-----

[piwi]

Pour répondre directement à votre question, non un PCR ne peut pas se faire sur une matrice simple brin.

Maintenant pour vous rassurer, en principe tous les protocoles de reverse transcription conduisent à la formation de l'ADNc double brin. Verifiez, je suis pratiquement certain que vous ne vous êtes pas arrêté après la dégradation de l'ARN sans avoir synthétisé le complémentaire. Ou alors c'est que vous aimez vous compliquer la vie grand gourmand!

Cordialement,
piwi

[invitec9f0f895]

Salut

désolé piwi mais oui une PCR peut se faire sur une matrice simple brin, la PCR permettant de synthétiser le second brin.

En revanche je ne comprends pas la question initiale, vu qu'en RT-PCR on synthetise en effet un cDNA simple brin mais que la PCR se fait directement sur cette matrice.

D'ailleur il est parfois inutile de faire de RT, de nombreuses taq possedent une activité reverse transcriptase

YOyo