Extraction d'acides nucléiques

[ggpessoa]

J'aurais voulu connaître succinctement les principes généraux (et pas les protocoles !!) des méthodes d'extraction de l'ADN plasmidique, ADN totaux, ADN chromosomique, ARN ! Parmis les ARN peut on séparer les ARNr, ARNt et ARNm ?
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[Yoyo]

Bonjour,

rapidement:
-Cassage des cellules
-on se debarasse des protéines, et des membranes (debris cellulaires).
a ce stade on a des ARN et de l'ADN.
Ensuite selon les cas :
on utilise un RNAse, DNAse free pour ne garder que les ADN.
ou une DNAse, RNAse free pour ne garder que les ARN.
On peut eventuellement les précipiter pour les concentrer.

LA séparation ADNg et plasmide se fait essentiellement sur la capacite de la soude d'attaquer plus rapidement l'ADNg que le plasmide (miniprep). Mais aussi sur le fait que l'ADNg se fragmente tres facilement vu sa taille.
Sinon a partir de la solution (extraction à partir de cellule de mammifere, levures etc..) de départ tu transformes des bacteries pour isoler le plasmide.

Pour les ARN, les ARNr representent 95% des ARN totaux.
Les ARNm eucaryotes peuvent etre purifiés grace a leur queue polyA.

Yoyo

[nayeki]

Bonjour,

rapidement:
-Cassage des cellules
-on se debarasse des protéines, et des membranes (debris cellulaires).
a ce stade on a des ARN et de l'ADN.
Ensuite selon les cas :
on utilise un RNAse, DNAse free pour ne garder que les ADN.
ou une DNAse, RNAse free pour ne garder que les ARN.
On peut eventuellement les précipiter pour les concentrer.

LA séparation ADNg et plasmide se fait essentiellement sur la capacite de la soude d'attaquer plus rapidement l'ADNg que le plasmide (miniprep). Mais aussi sur le fait que l'ADNg se fragmente tres facilement vu sa taille.
Sinon a partir de la solution (extraction à partir de cellule de mammifere, levures etc..) de départ tu transformes des bacteries pour isoler le plasmide.

Pour les ARN, les ARNr representent 95% des ARN totaux.
Les ARNm eucaryotes peuvent etre purifiés grace a leur queue polyA.

Yoyo

D'accord pour les plasmides, mais ca depend des protocoles
Tu peux aussi tres bien separer les plasmides par simple gene-clean apres electrophorese.

Par contre les ARNt c'est une bonne question

[ggpessoa]

Et sait-on pourquoi l'ADN plasmidique est moins rapidement attaqué par la soude ?

[Yoyo]

C'est un probleme de compaction, l'ADN plasmidique superenroulé.
POur les ARNt il est possible de les purifier sur gel, et meme de les purifier en gardant l'acide aminé attaché.

Yoyo

[A voir en vidéo sur Futura]