Induction vs. expression

[invite26b90904]

Bonjour,
je travaille actuellement sur un projet de clonage d'une protéine, et j'ai un peu de mal a comprendre la différence entre l'induction et l'expression d'une protéine....
comment définiriez s'il vous plaît vous l'induction?
comment définiriez s'il vous plaît vous l'expression?

quand j'ajoute de l'iptg par exemple j'induit ou bien j'exprime???

j'avoue que c'est pas très très clair, et mes recherches dans la littérature ne m'ont pas éclaircit les idées mais plutôt obscurci...


merci d'avance

boris
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[invite02cefc91]

En fait, tu induis une expression.

Par exemple, tu va avoir une séquence avec un promoteur inductible, qui une fois activé induira l'expression de la protéine en amont de la séquence.

[invite26b90904]

En fait, tu induis une expression.

Par exemple, tu va avoir une séquence avec un promoteur inductible, qui une fois activé induira l'expression de la protéine en amont de la séquence.

merci pour cette réponse,

donc si je comprend bien, âpres avoir réalisé l'étape de clonage, on induit l'expression, par exemple par ajout d'iptg?

encore merci

boris

[invite02cefc91]

Voila l'ajout d'iptg va induite induire l'expression de la proitéine

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite26b90904]

Voila l'ajout d'iptg va induite induire l'expression de la proitéine

ok, merci beaucoup, pour ces explications, cela me semble tout d'un coup beaucoup plus clair.

toute petite dernière question: donc si je comprend bien, la lignée cellulaire dans lequel on réalise la transformation est primordiale pour realiser une bonne expression??

[invite160a5434]

Bonsoir,

Je ne pense pas que ta questin porte réellement sur la lignée cellulaire, mais plutot sur la potentialité d'un gène a etre induit, je me trompe ?

[invite02cefc91]

oui la je vois pas bien le lien avec la lignée cellulaire.

C'est deux choses indépendantes pour moi. Après bien sur qu'une transformation de cette ligné avec le gène inductible en question, améliorera la production de la protéine (et encore cela ne marche pas souvent comme on le voudrait) ...

[MaliciaR]

Euh... Je ne suis pas totalement d'accord avec le manque de rapport entre les deux
Si j'ai une souche ne portant pas de système d'expression dépendant de l'induction à l'IPTG, c'est mal barré Puis, faut aussi voir que dans la souche d'expression en question l'IPTG doit induire préférentiellement le promoteur dont est dépendant le gène d'intérêt. (Je ne sais pas si je suis claire, les vacances ont été absentes de cet été , du coup un peu claquée, la Malicia...)

L'expression que tu fais est dans des BL21?

[invite26b90904]

oui l'expression que je fait est dans des lignees bl 21, au depart contenant uniquement le plasmide recombinee, puis comme il y a eut une fuite dans l'expression, on a rajoute un plasmide Lysozyme....

merci encore pour toutes vos réponses

boris

[MaliciaR]

oui l'expression que je fait est dans des lignees bl 21, au depart contenant uniquement le plasmide recombinee, puis comme il y a eut une fuite dans l'expression, on a rajoute un plasmide Lysozyme....

merci encore pour toutes vos réponses

boris

Tu as des BL21 avec pLysS ou un autre plasmide dedans? Il en existe 3 au total, avec des degrés de régulations différents.
Donc, si je comprends, tu as un plasmide recombiné provenant de pET. Le mieux ce serait que tu regardes les différentes cartes de plasmides et que tu dessines une carte de ton plasmide recombiné avec les promoteurs et que tu schématises les différentes interactions dans ta bactos d'expression.
Qu'est-ce que tu appelles "fuites dans l'exprression"? Arrives-tu à produire la protéine tout court? Elle vient d'où?

[invite26b90904]

Tu as des BL21 avec pLysS ou un autre plasmide dedans? Il en existe 3 au total, avec des degrés de régulations différents.
Donc, si je comprends, tu as un plasmide recombiné provenant de pET. Le mieux ce serait que tu regardes les différentes cartes de plasmides et que tu dessines une carte de ton plasmide recombiné avec les promoteurs et que tu schématises les différentes interactions dans ta bactos d'expression.
Qu'est-ce que tu appelles "fuites dans l'exprression"? Arrives-tu à produire la protéine tout court? Elle vient d'où?

merci pour ces réponses!!!!
j'ai des bl21 avec le plasmide recombiné + pLysS
On arrive à produire des protéines, on a utilisé pour cela une du cDNA du gène de la protéine que l'on cherchait a produire, on l'a d'abord amplifié par pcr puis insere dans un plasmide....

j'appelle fuite dans l'expression, une induction basale en l'absence d'iptg.
merci encore