CFSE assay

[invite5005e1fa]

Bonjour a tous,

J'ai un probleme avec un protocole visant a charactersier la proliferation cellulaire. C'est un protocole de cytometrie en flux appele CFSE et je n'arrive pas a avoir de resultats coherent .En gros meme si mes cellules se multiplissent (10 fois plus de cellules apres 7 jours), je n'ai toujours qu'un seul et unique pic.
J'ai tout essaye, changer la dilution de CFSE, changer de protocole, eviter l'exposition prolongee a la lumiere,etc... mais rien n'y fait.

Est-ce que quelqu'un utilise/a deja utilise ce protocole, et si oui cela a marche?

Merci bcp
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[sansplomb]

Bonjour,

Ce protocole CFSE fonctionne très bien avec des cellules comme les lymphocytes. Malheureusement, avec des lignées cellulaires c`est moins évident. si vous utilisez des lignées le mieux est de marquer les cellules puis de faire un tri sur l`intensité de fluorescence (20-30 canaux de large par ex). De plus, au delà de 6-7 divisions ça devient très dur a visualiser.

cordialement

[invite77749503]

Il y a un an, j'ai utilisé ce protocole,voir le lien
mon expérience a marché 2/3.
je suis d'accord avec sansplomb, ça marche bien avec les lymphocytes. Mais
pour étudier la prolifération des lignées, je préfère le test de prolifération MTT.


http://hedricklab.ucsd.edu/Protocol/CFSE.html

[invite5005e1fa]

Merci pour vos reponses,
Je travailles sur des lymphocytes, mais pas sur des lignees cellulaires. D'ou mon incomprehension (En effet cela devrais marcher).

J'ai essayer plusieurs protocoles, dont celui que tu m'as donne futurelight. La derniere explication possible serais un probleme avec mon batch. Je ne vois que cela.

Merci a tous les deux

[A voir en vidéo sur Futura]