Bonjour,
dans une manip de fluorescence on utilise un ligand fusionné à fc. La conclusion est que le ligand se lie bien au recepteur....mais je comprends pas à quoi sert la partie fc? Est ce qu elle sert à lier l'anticorps secondaire type Alexa? ou autre?
Dans ce cas, pourquoi ne pas utiliser un anticorps primaire contre le ligand puisqu il existe?
Merci pour vos reponses
Salut
tu as raison c'est possible mais en utilisant "encore une couche" c'est à dire un anticorps secondaire on améliore le signal de détection généralement. On parle d'amplification du signale.
Cependant, il faut faire attention car la plus part des cellules possédent des récepteurs aux Fc. Avant de mettre le ligant fusion il faux faire agir un bloquant de ces récepteurs. Si on ne fait pas sa, le signale détecté est-il du à la ligation du ligant sur son récepteur spécifique ou à la liaison de la parti Fc sur un récepteur Fc???? Peut-être à tu maintenant une critique a formuler....
cordialement
Merci pour ta réponse
Le fragment fc c'est bien la partie constante d'un anticorps ou pas? Dans ce cas, c est possible qu elle puisse etre liée par plusieurs autres molécules au point de mettre en doute la spécificité de l'experience?
Oui Fc = Fragment variable, c'est la parti de l'anticorps qui porte l'activité biologique de la molécule. En trot il existe différente classe d'anticorps par exemple les IgM sont les anticorps produit en premier lieu lors d'une réponse immunitaire et forme des pentamères donc des gros complexe qui forme des réseaux lors de complexe immun ( et sa sa à un effet biologique) les IgA c'est les anticorps sécrété pour proégé les muqueuse en contacte avec l'extérieur du corps, dans les larme par exemple. C'est grâce à des parti Fc différente que les IgM sont des Igm et les IgA sont des IgA.
Tout à l'heure je disais que il y 'avais à la surface des certaines cellules des recepteurs spécifique des fragments Fc. C'est récepteurs se trouves surtout sur les cellules imunitaire inné tel les macrophages... ( bactéries recouverte d'anticorps on dit opsonisé pourra ainsi être "mangé" par le macrophage plus facilement.....) donc tu vois certaines cellules ont ces récepteurs pour divers raisons.
C'est vrai que c'est surtout les cellules immunitaires mais je ne parierais pas que seulement les cellules immnitaire aient c'est types de récepteurs.
Donc pour conclure si les cellules de ton expérience sont des cellules immunitaires il est claire que sans le contrôle et tout se que j'ai expliqué dans le 1 er message tes résultats ne valent rien.
Si les cellules ne sont pas immunitaire au moins un contrôle ou l'on ne met QUE une partie Fc est nécessaire.
Pour tout a l'heure (vu que j'ai plus de temps ). Si tu ne fais agir que un Ac ( donc primaire) tu as une molécule fluo pour un Ac ( ratio 1:1 ). Maintenant tu à un Ac primaire de lapin et un Ac secondaire de poulet anti-lapin. Ce second Ac (secondaire) reconnait des épitopes ( de lapin) sur la chaine lourde de l'Ac primaire or un Ac c'est formé de deux chaines lourdes donc déja même avec un épitope il existera deux épitopes par Ac primaire. Donc un Ac primaire sera reconnu par deux Ac secondaire ( un par chaine lourde portant les épitopes ) donc deux molécule fluo pour un Ac primaire ( ration 1:2). Là tu vois que tu as un signale plus élevé en utilisant un Ac secondaire
Maintenant imagine que la plus part du temps il y'a plus de deux épitopes....
voila, j'éspére avoir été claire.
cordialement
merci bcp pour tes explications
bonne soirée
