bonjour à tous,
J'aimerai savoir à quoi servent le tampon RT 5x, le DTT et la RNase OUT qu'on a utilisé en TP pour tranformer nos ARN en ADNc.
Merci d'avance pour vos réponses(j'ai vu qu'il y en avaient qui étaient calé sur le sujet).
Bonne journée
Marjorie
- La RNAse OUT (nom commercial) est un inhibiteur des RNases, ces enzymes qui dégradent les ARN et ne sont donc pas souhaitables dans ces manipulationsEnvoyé par Marjorie66
- De même, le DTT est un réducteur fort qui va réagir avec les ponts disulfures, des groupements qui stabilisent ces RNases: le DTT contribuent donc à les déstabiliser.
- Le tampon contient tout les éléments nécessaire à la stabilité et à l'activité de la Reverse Transcriptase, et en cherchant un peu notamment dans ton cours tu devrais retrouver de quelle genre de molécules il peut s'agir
Le tampon RT, comme son nom l'indique, est là pour tamponer la solution au pH adapté à l'enzyme. Il contient aussi des sels, nécessaires à son activité.
Le RNase out est un inhibiteur de RNases (qui sinon dégraderaient tes ARNs).
Quand au DTT, je ne suis pas sûr mais je crois qu'on l'utilise pour réduire les ponts disulfure des RNases. Ne me demande pas pourquoi la RTase n'est pas affectée
Peut-être que quelqu'un pourra confirmer, ou corriger ma réponse.
Ptet parce qu'elle n'en a pasQuand au DTT, je ne suis pas sûr mais je crois qu'on l'utilise pour réduire les ponts disulfure des RNases. Ne me demande pas pourquoi la RTase n'est pas affectée
ce que j'aime bien dans la biologie, c'est que la réponse la plus simple est bien souvent la plus juste
Bonjour,
Génial, merci beaucoup pour toutes vos réponses, je commence à comprendre quelques truc mais j'ai encore un petit problème. Dans mon mélange je met à la fois du DTT qui stabilise les RNases (vous m'avez dit) et des RNases OUT qui qui détruisent ces ARN, je ne comprend donc pas l'utilité de les stabliser si on n'en veut pas.
De plus les ARN sur lesquels on travaille ont déjà été traité avec une DNase dite RNase free (une DNase sans RNase) alors pourquoi on doit encore rajouter une RNase OUT? parce qu'on aurait pu contaminer la solution pendant la manip avec des RNases qui trainent un peu partout?
Merci d'avance
Bonne journée.
Marjorie
autant pour moi je m'excuse j'avais mal lu en ce qui concerne le DTT qui destabilise les RNases ce qui aide à les éliminer comme la RNase OUT, je crois que j'ai bien compris cette fois, pardon
Ton eau est généralement RNAse free. C'est pour ne pas apporter des ARN : ils contamineront ta manipe...
Sinon, oui, les RNAses traînent partout, par exemple sur tes mains : c'est pour ça qu'il faut mettre des gants et les changer régulièrement
C'est quoi le rapport entre l'eau RNase Free, et les ARN contaminant ?
A mon avis c'est juste une petite confusion...
RNase-free = sans RNases (et pas sans ARNs).
Contaminer une manip par erreur avec des ARNs c'est pas évident ! Vu tout le mal qu'on se donne pour les garder en un seul morceau !
Euh... c'est la saison des boulettesOn considère que je n'ai rien dit...
