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Transcription inverse



  1. #1
    Marjorie66

    Transcription inverse

    bonjour à tous,

    J'aimerai savoir à quoi servent le tampon RT 5x, le DTT et la RNase OUT qu'on a utilisé en TP pour tranformer nos ARN en ADNc.
    Merci d'avance pour vos réponses(j'ai vu qu'il y en avaient qui étaient calé sur le sujet).

    Bonne journée
    Marjorie

    -----


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  3. #2
    jmbowie

    Re : transcription inverse

    Citation Envoyé par Marjorie66 Voir le message
    bonjour à tous,

    J'aimerai savoir à quoi servent le tampon RT 5x, le DTT et la RNase OUT qu'on a utilisé en TP pour tranformer nos ARN en ADNc.
    Merci d'avance pour vos réponses(j'ai vu qu'il y en avaient qui étaient calé sur le sujet).

    Bonne journée
    Marjorie
    - La RNAse OUT (nom commercial) est un inhibiteur des RNases, ces enzymes qui dégradent les ARN et ne sont donc pas souhaitables dans ces manipulations
    - De même, le DTT est un réducteur fort qui va réagir avec les ponts disulfures, des groupements qui stabilisent ces RNases: le DTT contribuent donc à les déstabiliser.
    - Le tampon contient tout les éléments nécessaire à la stabilité et à l'activité de la Reverse Transcriptase, et en cherchant un peu notamment dans ton cours tu devrais retrouver de quelle genre de molécules il peut s'agir
    Blast up your life!

  4. #3
    Fanou63

    Re : transcription inverse

    Le tampon RT, comme son nom l'indique, est là pour tamponer la solution au pH adapté à l'enzyme. Il contient aussi des sels, nécessaires à son activité.
    Le RNase out est un inhibiteur de RNases (qui sinon dégraderaient tes ARNs).
    Quand au DTT, je ne suis pas sûr mais je crois qu'on l'utilise pour réduire les ponts disulfure des RNases. Ne me demande pas pourquoi la RTase n'est pas affectée

    Peut-être que quelqu'un pourra confirmer, ou corriger ma réponse.

  5. #4
    MaliciaR

    Re : transcription inverse

    Citation Envoyé par Fanou63 Voir le message
    Quand au DTT, je ne suis pas sûr mais je crois qu'on l'utilise pour réduire les ponts disulfure des RNases. Ne me demande pas pourquoi la RTase n'est pas affectée
    Ptet parce qu'elle n'en a pas
    An expert is one who knows more and more about less and less.

  6. #5
    Fanou63

    Re : transcription inverse

    ce que j'aime bien dans la biologie, c'est que la réponse la plus simple est bien souvent la plus juste

  7. A voir en vidéo sur Futura
  8. #6
    Marjorie66

    Re : Transcription inverse

    Bonjour,

    Génial, merci beaucoup pour toutes vos réponses, je commence à comprendre quelques truc mais j'ai encore un petit problème. Dans mon mélange je met à la fois du DTT qui stabilise les RNases (vous m'avez dit) et des RNases OUT qui qui détruisent ces ARN, je ne comprend donc pas l'utilité de les stabliser si on n'en veut pas.
    De plus les ARN sur lesquels on travaille ont déjà été traité avec une DNase dite RNase free (une DNase sans RNase) alors pourquoi on doit encore rajouter une RNase OUT? parce qu'on aurait pu contaminer la solution pendant la manip avec des RNases qui trainent un peu partout?
    Merci d'avance
    Bonne journée.
    Marjorie

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  10. #7
    Marjorie66

    Re : Transcription inverse

    autant pour moi je m'excuse j'avais mal lu en ce qui concerne le DTT qui destabilise les RNases ce qui aide à les éliminer comme la RNase OUT, je crois que j'ai bien compris cette fois, pardon

  11. #8
    MaliciaR

    Re : Transcription inverse

    Citation Envoyé par Marjorie66 Voir le message
    De plus les ARN sur lesquels on travaille ont déjà été traité avec une DNase dite RNase free (une DNase sans RNase) alors pourquoi on doit encore rajouter une RNase OUT? parce qu'on aurait pu contaminer la solution pendant la manip avec des RNases qui trainent un peu partout?
    Ton eau est généralement RNAse free. C'est pour ne pas apporter des ARN : ils contamineront ta manipe...
    Sinon, oui, les RNAses traînent partout, par exemple sur tes mains : c'est pour ça qu'il faut mettre des gants et les changer régulièrement
    An expert is one who knows more and more about less and less.

  12. #9
    IngDr

    Re : Transcription inverse

    Citation Envoyé par MaliciaR Voir le message
    Ton eau est généralement RNAse free. C'est pour ne pas apporter des ARN : ils contamineront ta manipe...

    C'est quoi le rapport entre l'eau RNase Free, et les ARN contaminant ?

  13. #10
    Fanou63

    Re : Transcription inverse

    Citation Envoyé par IngDr Voir le message
    C'est quoi le rapport entre l'eau RNase Free, et les ARN contaminant ?
    A mon avis c'est juste une petite confusion...
    RNase-free = sans RNases (et pas sans ARNs).

    Contaminer une manip par erreur avec des ARNs c'est pas évident ! Vu tout le mal qu'on se donne pour les garder en un seul morceau !

  14. #11
    MaliciaR

    Re : Transcription inverse

    Citation Envoyé par IngDr Voir le message
    C'est quoi le rapport entre l'eau RNase Free, et les ARN contaminant ?
    Euh... c'est la saison des boulettes On considère que je n'ai rien dit...
    An expert is one who knows more and more about less and less.

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