Bonjour
J'ai travaillé pendant un stage sur un rétrovirus et j'ai du procéder à des RT-PCR. J'ai un doute sur la transcription inverse in vitro à savoir obtient-on un simple brin d'ADN ou bien un ADN bicaténaire (par action de l'activité nucléasique de la réverse transcriptase que l'on peut observer in vivo) ?
Merci
salut,
Les RTs ont souvent une activité RNase. Mais pas DNA polymerase... Donc tu te retrouves soit avec un simple brin (cDNA) soit avec un hybride (en partie au moins) DNA-RNA.
Bah c'est ce que je croyait mais j'ai vu en cours dernièrement que in vivo la RT synthétisait un brin d'ADN avec un coude ce qui permettait un repliement et la synthèse de bases complémentaires. Et apparement la RT possède une activité nucléasique qui lui permet de couper le brin au niveau de ce coude et on obtient au final un ADN bicaténaire.
Seulement apparement in vitro on n'obtient qu'un seul brin mais ça j'en suis pas sure !!
Merci quand meme kurosawa je crois que je vais rester sur un seul brin d'ADN synthétisé.
salut,
EN effet in vitro tu ne synthetises qu'un seul brin d'ADN, Si ton enzyme possede une activite RNAseH alors la partie ARN du duplexe ARN-ADN forme va etre degrade, laissant un simple brin d'ADN.
In vivo, ce que tu appeles le coude sert d'amorce a la synthese du brin complementaire par un ADN polymerase ADN dependante. Il n'est pas exclu que certaine reverse pol possede cette activite, faudrait que je cherche un peu.
Yoyo
Salut !
Comme quoi, les dogmes...
J'ai trouvé un truc interessant dont voici un extrait :
Reverse Transcribe Templates up to 12 kb
Reverse Transcriptase AMV can be used for first- and second-strand cDNA synthesis and dideoxy DNA sequencing. The enzyme can also be used for primer extension, RNA sequencing, 3'-end labeling of DNA fragments, generation of single-stranded probes for hybridization, and in genomic footprint experiments.
Product Description
AMV (Avian Myeloblastosis Virus) Reverse Transcriptase is a RNA directed DNA polymerase and a DNA-dependent DNA polymerase.
Its thermal tolerance permits efficient transcription at temperatures up to 60°C, thereby eliminating problems caused by secondary structures of the RNA. The AMV reverse transcriptase requires a primer as well as Mg2+ or Mn2+ for activity.
http://www.roche-applied-science.com..._rtpcr/amv.htm
Envoyé par kurosawa
mais tu écris vraiment n'importe quoi toi!!
désolé de te parler comme ça mais précisons les bons termes
La RT, enzyme isolée des rétrovirus ,est une ADN polymérase ARN dépendante!!
cette RT comporte une activité RNase dans la plupart des cas.
mr YOYO a raison en ce qui concerne le "coude"
ah vous dites "in vitro un seul brin d'ADNc est synthétisé" mouai pas d'accord->
ayant tous les outils de biomol,on peut in vitro synthétiser un double brin d'ADNc
voilà
Calme toi mister ! On est pas des bêtes, on discute
Ici on parlait de RT-PCR, donc je vois pas en quoi tu es pas d'accord, que la RT synthétise un ADN simple brin on s'en fiche puisqu'il va etre amplifié ensuite par la PCR classique.
Pour yoyo :
La RT de VIH est une ADN polymérase ARN dépendante et ADN dépendante.
