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Beta actine : contrôle interne en PCR



  1. #1
    Rit04

    Beta actine : contrôle interne en PCR


    ------

    Bonjour à tous,
    je travaille actuellement à la mise en place d'un contrôle interne endogène dans une PCR. Je vois que beaucoup utilise la beta actine qui est présente dans toutes les cellules.
    Je ne trouve aucune information sur la beta actine. Pourriez vous me dire de quoi il s'agit exactement SVP?
    merci à tous

    -----

  2. Publicité
  3. #2
    piwi

    Re : beta actine : contrôle interne en PCR

    L'actine beta est une des isoformes de l'actine que l'on trouve dans les tissus non musculaires (où l'on trouve l'actine alpha).
    Je ne vous explique pas ce qu'est l'actine. J'imagine que la question porte sur le beta plus que sur la fonction même de l'actine.

    Cordialement,
    piwi
    Je sers la science et c'est ma joie.... Il parait.

  4. #3
    Rit04

    Re : beta actine : contrôle interne en PCR

    merci bcp; je trouve enfin une réponse!!!!

  5. #4
    Fanou63

    Re : beta actine : contrôle interne en PCR

    Si c'est pour de la PCR quantitative, il vaut mieux tester plusieurs gènes de référence, car selon le traitement que tu infliges à tes animaux (ou cellules) l'expression de certains gènes, y compris la beta-actine, peut varier.
    Je dis ça parce que j'ai dû abandonner moi-même la beta-actine pour ces raisons...
    Peut-être que tu trouvera un article dans lequel ce genre de test a déjà été fait sur le modèle que tu utilises.

    Pour info on utilise aussi classiquement la beta-2-microglobuline (B2M), la protéine ribosomale 18S (RP18S), l'hypoxanthine-guanine phosphorybosyltransferase (HPRT, préférentiellement pour des neurones) la glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase (GAPDH), la 2 Glucose-6-Phosphate Dehydrogenase (G6PDH) ou encore l'histone H2A.

  6. #5
    Marj1206

    Re : Beta actine : contrôle interne en PCR

    Bonjour,
    A l'époque où je faisais pas mal de quantification relative en PCR temps réel, j'utilisais les essais TaqMan prêts à l'emploi commercialisés par Applied Biosystems, qui marchaient très bien.
    J'ai vu qu'ils venaient de sortir une plaque spéciale contrôles endogènes avec des essais TaqMan préchargés pour 32 gènes différents. C'est peut-être un bon moyen d'identifier le meilleur contrôle pour vos études. Voici le lien: https://products.appliedbiosystems.c...2&catID=605458
    Bon courage pour la suite!

  7. A voir en vidéo sur Futura
  8. #6
    Rit04

    Re : Beta actine : contrôle interne en PCR

    en fait je travaille surtout en syber green donc je ne fais pas de pcr quantitative.
    Merci à tous pour toutes vos suggestions

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  10. #7
    piwi

    Re : Beta actine : contrôle interne en PCR

    Si je puis me permettre, le "donc" de votre message est inapproprié. Je fais de la qPCR et je la fais en Sybrgreen (et je suis loin d'être le seul ). Il n'y a absolument aucune exclusion entre les deux.

    Cordialement,
    piwi
    Je sers la science et c'est ma joie.... Il parait.

  11. #8
    Rit04

    Re : Beta actine : contrôle interne en PCR

    c'est exact, je suis allée un peu vite pour faire ma réponse. C'est vrai que nous , nous ne faisons pas de PCR quantitative mais pour valider nos méthodes nous avons effectué des quantifications.
    Nus avons utilisé des gammes de dilutions dont les charges virales ou bactériennes étaient connues. Vous procédez de la meme façon aussi?

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