Plasmide recombinant & carte de restriction

[invitefc383fc2]

Bonjour à tous,
je suis étudiante en sciences de vivant et ayant mes examens prochainement, je suis évidemment en pleine révisions.
En essayant de faire un exercice de biochimie dans les annales, je rencontre qq problèmes:
il s'agit d'un exercice sur les acides nucléiques : un gène d'interêt a été cloné dans un plasmide ( ce dernier fait 2700 paires de bases)
Nous avons d'une part une représentation du gène qui fait 1400 paires de bases ( extrémité 5 ' : SmaI ; extrémité 3' HindIII ), ainsi qu'un schéma du plasmide. Nous disposons également du gel d'agarose de l'analyse de restriction du plasmide recombinant :
- une première digestion est effectuée par KpnI ( qui se trouve dans la casette de clonage) --> on obtient 2 bandes de 3700 et 400
- une deuxième digestion par NdeI ( qui n'est pas dans la casette de clonage) --> on obtient les meme bandes que précédemment
- enfin une double digestion avec les deux enzymes précédentes -->on obtient une bandes à 3500 et une bande plus épaisse à 200 ( représente probablement 3 fragments)

Il faut avec ceci établir une carte de restriction,en placant les différents sites.
N'ayant jms fait d'exercice de ce genre, je ne sais par ou commencer, ni comment procéder ..
En espèrant que vous ayez du temps à m'accorder et en vous remerciant d'avance.
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[Yoyo]

Salut

les cartes de restrictions ne sont que de la logique, aucun besoin d'avoir la moindre connaissance en biologie (ou presque )

J'ai du mal a comprendre ce que tu n'arrives pas a faire. Il suffit que tu prédises les tailles attendues et que tu les compares avec ceux obtenus

Yoyo

[invite53736d08]

Bonjour, j'en profite car j’ai un exercice similaire à faire sauf que les deux enzymes se trouvent dans la casette de clonage. Je vous explique :
On clone un gène dans un plasmide. Puis on digère avec plusieurs enzymes.
Une première digestion avec BamHI (se trouve dans la casette de clonage)qui donne 2 fragments de 4500 et 100
Une deuxième ave EcoRI (se trouve également dans la casette) qui donne les mêmes bandes et enfin on effectue une double digestion avec les 2 enzymes précédentes et on obtient 1 bande de 4000 et une seconde qui correspond à 3 bandes de 500.
Comment peut-on alors savoir quelle enzyme coupe l’autre :
Il me semble que l’on peut avoir EcoRI qui coupe le fragment de 1000 de BamHI en son milieu ou alors l’inverse BamHI qui coupe le fragment de 1000 de EcoRI en son milieu, non ?
on aurait alors soit :
-EcoRI - BamHI - EcoRi
ou
-BamHI - EcoRI - BamHi
Comment determiner quelle carte est correcte?
Une 1ère digestion du plasmide non recombiné a été effectuée (donnant un fragment de 4500), faut-il alors s’aider de celle ci?
je vous remercie d'avance

[Yoyo]

Salut

c'est 4000 et 1000 ou 100 comme tu l'as ecrit ?
ce qui est sur c'est que tu as deux sites pour chacune des enzymes. Vu ton ennoncé tu ne peux pas différencier les deux propositions que tu cites.

Yoyo

[A voir en vidéo sur Futura]