Carte de restriction d'un plasmide

[invitea302e366]

Bonjour

Je n'arrive pas à trouver la méthode pour faire des cartes de restriction

Voici mon exercice

On se propose d'établir la carte des sites de restriction d'un plasmide P

P possède des sites uniques pour les endonucléases EcoRI BamHI et BalI
Le site EcoRI est choisi comme point 0 à partir duquel sont déterminées les distances des autres sites

Des digestions avec une ou 2 enzymes sont réalisées, les produits de la digestion sont soumis à une électrophorèse. On dtermine pour chaque puits le nombre et la taille des fragments de restriction par comparaison avec la migration de fragments d'ADN de taille connue. Les résultats sont dans le tableau suivant


Puits / Enzymes de restriction / Nbre de bandes / Tailles des fragments en pdb
1 EcoRI + BamHI 2 606 et 3544

2 EcoRI + BalI 2 2020 et 2130

3 BamHI + BalI 2 1414 et 2736

4 Pst I 2 1869 et 2281

5 EcoRI + PStI 3 881 et 1869 et 1400

6 Bal I + PstI 3 1139 et 730 et 2281




Questions

1) Déterminez les positions des sites BamHI et Bal I par rappor à EcoRI
2) Combien de site PstI le plasmide P possède t-il ? Déterminez leur position par rapport au site EcoRI


Mercii pour ceux qui vondront bien m'aider
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[invitee4e79868]

Bonjour,

Donc, tu souhaites la méthode...
Le plus simple (pour moi) est de prendre crayons de couleurs et papier, et dessiner
Ok, cela n'aide pas vraiment, dis comme cela, mais lorsque je devais faire une carte de restriction, le plus dur est de la commencer. Une fois que tu as les deux premiers sites, cela devient généralement plus facile. Je te conseille donc de tracer un cercle, placer le site EcoRI, puis son copain, BamHI. Puis tu fais de même avec BalI. A force de recoupement, tu devras normalement te rendre compte qu'il ne peut y avoir qu'une position pour BamHI vis-à-vis de BalI et EcoRI. Tu pourras alors passer au trois fragments avec PstI.

En espérant avoir été clair.

[invitee11a94a7]

bonjour tout le monde! s'il vous plait je vous savoir comment on peut déterminer la taille d'un vecteur et celle d'ADN génomique dans un plasmide recombinant, j'ai trop cherché sur l'internet mais j'ai pas trouvé la réponse précise! merci d'avance..

[invitecde43c52]

bonjour tout le monde! s'il vous plait je vous savoir comment on peut déterminer la taille d'un vecteur et celle d'ADN génomique dans un plasmide recombinant, j'ai trop cherché sur l'internet mais j'ai pas trouvé la réponse précise! merci d'avance..

Question confuse. Dans un plasmide recombinant on a un vecteur et un insert. L'ADN génomique humain a une taille d'environ 3 000 000 000 Nt. Mais je suppose que c'est la taille de l'insert du plasmique recombinant que tu veux...

C'est simple : digestion par la/les enzyme(s) ayant servi à la digestion de l'insert et du plasmide ==> électrophorèse.

[A voir en vidéo sur Futura]

[invitefa74b584]

Bonjour à tous j'ai également un problème au sujet d'un exercice sur les cartes de restriction j'ai mis le fichier en question, il s'agit de la fin de l'exercice 1 de ce TD ou il faut donner la carte de restriction du plasmide pk rec
On a la correction que je vous ait aussi mis seulement j'ai dû mal à la comprendre. Mon problème est surtout lorsqu'il faut mettre les sites de restriction
AInsi je comprend pas du totu leurs placement, par exemple pourquoi Bam H1 ne se trouve t-il pas à 3700 pb?de même pour EcoR1 qui ne se trouve pas comme indiqué à 3300 dans le plasmide
merci d'avance