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Carte de restriction d'un plasmide



  1. #1
    cachou2013

    Carte de restriction d'un plasmide


    ------

    Bonjour

    Je n'arrive pas à trouver la méthode pour faire des cartes de restriction

    Voici mon exercice

    On se propose d'établir la carte des sites de restriction d'un plasmide P

    P possède des sites uniques pour les endonucléases EcoRI BamHI et BalI
    Le site EcoRI est choisi comme point 0 à partir duquel sont déterminées les distances des autres sites

    Des digestions avec une ou 2 enzymes sont réalisées, les produits de la digestion sont soumis à une électrophorèse. On dtermine pour chaque puits le nombre et la taille des fragments de restriction par comparaison avec la migration de fragments d'ADN de taille connue. Les résultats sont dans le tableau suivant


    Puits / Enzymes de restriction / Nbre de bandes / Tailles des fragments en pdb
    1 EcoRI + BamHI 2 606 et 3544

    2 EcoRI + BalI 2 2020 et 2130

    3 BamHI + BalI 2 1414 et 2736

    4 Pst I 2 1869 et 2281

    5 EcoRI + PStI 3 881 et 1869 et 1400

    6 Bal I + PstI 3 1139 et 730 et 2281




    Questions

    1) Déterminez les positions des sites BamHI et Bal I par rappor à EcoRI
    2) Combien de site PstI le plasmide P possède t-il ? Déterminez leur position par rapport au site EcoRI


    Mercii pour ceux qui vondront bien m'aider

    -----
    Dernière modification par cachou2013 ; 12/05/2013 à 21h40.

  2. Publicité
  3. #2
    biseibutsu

    Re : Carte de restriction d'un plasmide

    Bonjour,

    Donc, tu souhaites la méthode...
    Le plus simple (pour moi) est de prendre crayons de couleurs et papier, et dessiner
    Ok, cela n'aide pas vraiment, dis comme cela, mais lorsque je devais faire une carte de restriction, le plus dur est de la commencer. Une fois que tu as les deux premiers sites, cela devient généralement plus facile. Je te conseille donc de tracer un cercle, placer le site EcoRI, puis son copain, BamHI. Puis tu fais de même avec BalI. A force de recoupement, tu devras normalement te rendre compte qu'il ne peut y avoir qu'une position pour BamHI vis-à-vis de BalI et EcoRI. Tu pourras alors passer au trois fragments avec PstI.

    En espérant avoir été clair.
    微生物

  4. #3
    riyanna

    Re : Carte de restriction d'un plasmide

    bonjour tout le monde! s'il vous plait je vous savoir comment on peut déterminer la taille d'un vecteur et celle d'ADN génomique dans un plasmide recombinant, j'ai trop cherché sur l'internet mais j'ai pas trouvé la réponse précise! merci d'avance..
    Dernière modification par riyanna ; 18/06/2014 à 18h30.

  5. #4
    Lort974

    Re : Carte de restriction d'un plasmide

    Citation Envoyé par riyanna Voir le message
    bonjour tout le monde! s'il vous plait je vous savoir comment on peut déterminer la taille d'un vecteur et celle d'ADN génomique dans un plasmide recombinant, j'ai trop cherché sur l'internet mais j'ai pas trouvé la réponse précise! merci d'avance..
    Question confuse. Dans un plasmide recombinant on a un vecteur et un insert. L'ADN génomique humain a une taille d'environ 3 000 000 000 Nt. Mais je suppose que c'est la taille de l'insert du plasmique recombinant que tu veux...

    C'est simple : digestion par la/les enzyme(s) ayant servi à la digestion de l'insert et du plasmide ==> électrophorèse.

  6. #5
    Astyan06100

    Re : Carte de restriction d'un plasmide

    Bonjour à tous j'ai également un problème au sujet d'un exercice sur les cartes de restriction j'ai mis le fichier en question, il s'agit de la fin de l'exercice 1 de ce TD ou il faut donner la carte de restriction du plasmide pk rec
    On a la correction que je vous ait aussi mis seulement j'ai dû mal à la comprendre. Mon problème est surtout lorsqu'il faut mettre les sites de restriction
    AInsi je comprend pas du totu leurs placement, par exemple pourquoi Bam H1 ne se trouve t-il pas à 3700 pb?de même pour EcoR1 qui ne se trouve pas comme indiqué à 3300 dans le plasmide
    merci d'avance
    Fichiers attachés Fichiers attachés

  7. A voir en vidéo sur Futura

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