Aide pour l'interprétation d'observations microscopiques

[invite2335dc2a]

Bonjour

j'ai réalisé une experience qui consistait a mettre plusieurs types de cellues (levures de boulanger, bacteries de yaourt, algues) dans plusieurs milieu censé etre cryoprotecteurs, le tout au congelateur (-20°C) pendant trois semaines.
Au final ça fais 18 solutions différentes (6*3)

J'ai pris une photo par solutions (au microscope optique), mais seulement je ne peut pas les interpréter.
Des fois il y a des différences mais je ne sais pas a quoi ça correspond et peut-etre y a t'il aussi des choses que je ne vois pas.

Si il y a un prof d'SVT ou toute autre personne capable d'interpréter ces observations, merci de me le dire, je vous enverrais les photos par mp
-----

[Zellus]

Salut,

Ce serait aussi bien que tu postes tes photos ici. Comme ça il y aurait plusieurs personnes qui pourraient t'aider, et la réponse pourrait aussi aider ceux qui ont le même problème que toi.

[invite2335dc2a]

heu ouais pourquoi pas, mais bon c'est quand même un travail personnel et assez important donc à la base je voulais pas que nimporte qui y ait acces, mais bon...

je finis de les uploader et je les met ici

[invite2335dc2a]

Explications :

S1 : glycérol à faible concentration
S2 : sucre à forte concentration
S3 : sel à concentration moyenne
S4 : S1+S3 (mêmes concentrations que S1 et S3 de base)
S5 : S1+S2 (....)
S6 : eau non distillée

AL : algues
BP : bactéries de yaourt
LE : levure de boulanger



S1AL : <img src="http://img404.imageshack.us/img404/4666/s1al002id7.jpg"/>

S1LE : <img src="http://img147.imageshack.us/img147/9829/s1leei1.jpg" border="0" alt="Image Hosted by ImageShack.us"/></a><br/><a href="http://g.imageshack.us/img147/s1leei1.jpg/1/"><img src="http://img147.imageshack.us/img147/s1leei1.jpg/1/w1600.png" border="0">

S2AL : <img src="http://img210.imageshack.us/img210/4202/s2al1yn0.jpg" border="0" alt="Image Hosted by ImageShack.us"/></a><br/><a href="http://g.imageshack.us/img210/s2al1yn0.jpg/1/"><img src="http://img210.imageshack.us/img210/s2al1yn0.jpg/1/w1600.png" border="0">

S2BP : <img src="http://img442.imageshack.us/img442/9701/s2bpzi9.jpg" border="0" alt="Image Hosted by ImageShack.us"/></a><br/><a href="http://g.imageshack.us/img442/s2bpzi9.jpg/1/"><img src="http://img442.imageshack.us/img442/s2bpzi9.jpg/1/w1600.png" border="0">

S2LE : <a href="http://imageshack.us"><img src="http://img134.imageshack.us/img134/4435/s2lesj3.jpg" border="0" alt="Image Hosted by ImageShack.us"/></a><br/><a href="http://g.imageshack.us/img134/s2lesj3.jpg/1/"><img src="http://img134.imageshack.us/img134/s2lesj3.jpg/1/w1600.png" border="0"></a>

S3AL : <a href="http://imageshack.us"><img src="http://img179.imageshack.us/img179/9565/s3al002ug6.jpg" border="0" alt="Image Hosted by ImageShack.us"/></a><br/><a href="http://g.imageshack.us/img179/s3al002ug6.jpg/1/"><img src="http://img179.imageshack.us/img179/s3al002ug6.jpg/1/w1600.png" border="0"></a>

S3BP : <a href="http://imageshack.us"><img src="http://img145.imageshack.us/img145/1618/s3bpkl8.jpg" border="0" alt="Image Hosted by ImageShack.us"/></a><br/><a href="http://g.imageshack.us/img145/s3bpkl8.jpg/1/"><img src="http://img145.imageshack.us/img145/s3bpkl8.jpg/1/w1600.png" border="0"></a>

S3LE : <a href="http://imageshack.us"><img src="http://img136.imageshack.us/img136/5591/s3lewn1.jpg" border="0" alt="Image Hosted by ImageShack.us"/></a><br/><a href="http://g.imageshack.us/img136/s3lewn1.jpg/1/"><img src="http://img136.imageshack.us/img136/s3lewn1.jpg/1/w1600.png" border="0"></a>

S4AL : <a href="http://imageshack.us"><img src="http://img264.imageshack.us/img264/9923/s4al3mf9.jpg" border="0" alt="Image Hosted by ImageShack.us"/></a><br/><a href="http://g.imageshack.us/img264/s4al3mf9.jpg/1/"><img src="http://img264.imageshack.us/img264/s4al3mf9.jpg/1/w1600.png" border="0"></a>

S4BP : <a href="http://imageshack.us"><img src="http://img261.imageshack.us/img261/6295/s4bp001zl8.jpg" border="0" alt="Image Hosted by ImageShack.us"/></a><br/><a href="http://g.imageshack.us/img261/s4bp001zl8.jpg/1/"><img src="http://img261.imageshack.us/img261/s4bp001zl8.jpg/1/w1600.png" border="0"></a>

S4LE : <a href="http://imageshack.us"><img src="http://img166.imageshack.us/img166/4278/s4lepa2.jpg" border="0" alt="Image Hosted by ImageShack.us"/></a><br/><a href="http://g.imageshack.us/img166/s4lepa2.jpg/1/"><img src="http://img166.imageshack.us/img166/s4lepa2.jpg/1/w1600.png" border="0"></a>

S5AL : <a href="http://imageshack.us"><img src="http://img338.imageshack.us/img338/5937/s5al2gw2.jpg" border="0" alt="Image Hosted by ImageShack.us"/></a><br/><a href="http://g.imageshack.us/img338/s5al2gw2.jpg/1/"><img src="http://img338.imageshack.us/img338/s5al2gw2.jpg/1/w1600.png" border="0"></a>

S5BP : <a href="http://imageshack.us"><img src="http://img518.imageshack.us/img518/4845/s5bpzh5.jpg" border="0" alt="Image Hosted by ImageShack.us"/></a><br/><a href="http://g.imageshack.us/img518/s5bpzh5.jpg/1/"><img src="http://img518.imageshack.us/img518/s5bpzh5.jpg/1/w1600.png" border="0"></a>

S5LE : <a href="http://imageshack.us"><img src="http://img167.imageshack.us/img167/904/s5le3bp8.jpg" border="0" alt="Image Hosted by ImageShack.us"/></a><br/><a href="http://g.imageshack.us/img167/s5le3bp8.jpg/1/"><img src="http://img167.imageshack.us/img167/s5le3bp8.jpg/1/w1600.png" border="0"></a>

S6AL : <a href="http://imageshack.us"><img src="http://img99.imageshack.us/img99/9423/s6alig1.jpg" border="0" alt="Image Hosted by ImageShack.us"/></a><br/><a href="http://g.imageshack.us/img99/s6alig1.jpg/1/"><img src="http://img99.imageshack.us/img99/s6alig1.jpg/1/w1600.png" border="0"></a>

S6BP : <a href="http://imageshack.us"><img src="http://img515.imageshack.us/img515/4715/s6bpab0.jpg" border="0" alt="Image Hosted by ImageShack.us"/></a><br/><a href="http://g.imageshack.us/img515/s6bpab0.jpg/1/"><img src="http://img515.imageshack.us/img515/s6bpab0.jpg/1/w1600.png" border="0"></a>

S6LE :

[A voir en vidéo sur Futura]

[Zellus]

Il y a un petit problème avec la plupart de tes photos ...

[invite2335dc2a]

jpeut pas éditer, je recommence:

Explications :

S1 : glycérol à faible concentration
S2 : sucre à forte concentration
S3 : sel à concentration moyenne
S4 : S1+S3 (mêmes concentrations que S1 et S3 de base)
S5 : S1+S2 (....)
S6 : eau non distillée

AL : algues
BP : bactéries de yaourt
LE : levure de boulanger



S1AL : S1LE :

S2AL : S2BP : S2LE :

S3AL : S3BP :

[invite2335dc2a]

S3LE :

S4AL : S4BP : S4LE :

S5AL : S5BP : S5LE :

[invite2335dc2a]

S6AL : S6BP : S6LE :

[invite2335dc2a]

un ptit Up!!

[invite2335dc2a]

up!!!!!!!!!!

[invited815d11c]

Pour interpréter ces photos, il faudrait avoir le grossissement de chacune.

[invite2335dc2a]

du 400 je pense
ça a été fais avec un microscope banal avec 3 "zoom"

[invited815d11c]

Dans une photo au microscope, on ne donne jamais le grossissement par un facteur multiplicateur. La raison est simple, a chaque fois que le modifie la photo, il est possible que je change ses dimensions. Si je la regarde avec un autre écran que le tiens, j'aurai le même problème. Par exemple, sur deux écrans de même dimensions mais avec une résolution différente, la photo sera plus grande sur celui qui aura la plus faible résolution. Donc les mesures que je pourrais faire n'auront aucune valeur puisque je ne pourrais pas remonter à la valeur d'origine.

La bonne méthode consiste à tracer un trait bien contrasté (blanc sur fond noir ou le contraire) de dimension précise. Par exemple, tu traces un trait représentant 10µm sur une photo. Si je modifie la taille de la photo, le trait suivra cette modification de taille mais représentera toujours la même longueur. Je pourrais donc connaître la taille des structure en comparant leur dimension avec celle du trait.



Pour interpréter tes photos, il faut que tu fasses une mesure de la densité cellulaire. Pour les levures, tu délimites une zone identique pour chaque type de cellule et tu comptes le nombre de cellules. Tu compares la valeur obtenue avec le liquide cryoprotecteur. Pour les bactéries, tu ne peux pas compter les cellules individuelle, tu mesures donc l'aire de la colonie (un logiciel de traitement d'image est quasiment indispensable ici). Pour les algues tu procèdes comme les levures, mais comme les cellules sont plus grosses, tu peux y ajouter un jugement qualitatif sur leur état.

Essaye et donne ici tes estimations.

[invite2335dc2a]

heu ...

disons que tout ça a passé 3 semaines à -20°C donc je pense pas qu'il y est eu des modifications, a part pendant les changements de température.

On a mis les levures en culture avec du sucre au pifomètre, tout en sachant que trop de sucre est nuisible (voir S2LE, elles sont bien amochées je trouve, avec 3mol.L-1 de saccharose)

et une erreur de ma part, j'ai mis des concentrations en bactérie/levure/algue différentes entre chaque solutions.

[invited815d11c]

Si tes concentrations cellulaires de départ sont différentes, tu ne peux rien déduire des photos seules.

Je suppose que le but de ton TP est de determine le cryoproctecteur le plus efficace. Cela se fait en comptant le nombre de cellules survivantes après décongélation. Ce qui implique que pour chaque type de cellule, tu as la même concentration de départ.

Mais tu peux encore t'en sortir si tu connais avec précision ces concentrations de départ. C'est le cas ?

[invite2335dc2a]

Les concentrations de départ en quoi?

Sinon non a mis les levures en culture(apres les avoir décongeler), et ça a fonctionner (apparemment)

Un tube a essai (bouché hermétiquement) a explosé et tout les autres on eu un bruit similaire a l'ouverture d'une canette de boisson gazeuse!
j'en déduis donc que les levures se sont multipliées, ou alors qu'il y a eu fermentation (une aide sur cette question là serait la bienvenue!)

Pour le tube témoin, après contage, on a constaté une baisse du nombre de cellule, ce qui est plustôt positif.
Et avec la solution 1 (de glycérol), il a été difficile de voir les lignes des lames de Malasseze (dsl pour l'ortho) tellement la concentration en cellule était élevée!

Pour les photos de ce sujet, je pensais plutôt à une analyse sur la forme des cellules, des choses qui permettent rien qu'en les voyant de déterminer si elles sont vivantes ou mortes (parce que là nos expériences avec les bactéries et les algues servent à rien ...)

[invited815d11c]

La concentration cellulaire de départ = le nombre de cellules par unité de volume au début de l'expérience (avant congélation donc).

il a été difficile de voir les lignes des lames de Malasseze (dsl pour l'ortho) tellement la concentration en cellule était élevée

Problème assez simple à résoudre. Tu dilues par 10 ton milieu de culture avant comptage. Tu n'oublie pas de multiplier par 10 après comptage.

Sur des cellules aussi petites que des bactérie ou des levures, il est impossible d'observer une quelconque morphologie. Pour les algues, c'est différent puisque tu vois des cellules bien vertes sur une seule photo et le néant total sur les autres.

Pour déterminer si des cellules sont vivantes ou mortes, il existe des colorants qui pénètrent dans les cellules mortes et pas dans les cellules vivantes? Seul l'un d'eux te permettra de différencier les deux groupes de cellules.

Donne les valeurs de tes comptages ici, avec tes conclusions.

[invite2335dc2a]

Ça fais maintenant une semaine que tout est remis a temperature normale, tu crois qu'on peut encore faire des experiences fiables sur les bactéries et les algues?

(les comptages et interprétations arrivent)

[invited815d11c]

AU bout de 10 jours, les différences que tu observeras seront plutôt dues à des biais dans la culture qu'à des différences dans la congélation. Pour certaines bactéries, cela fait plus de 700 générations, de quoi peupler la totalité du globe et bien plus. Alors un tube a essai ...

[invite2335dc2a]

Il me faudrait des infos sur la photos S6LE ( http://img156.imageshack.us/img156/9370/s6le2gf3.jpg )

Est-ce que les cellules sur le milieu de l'image, qui sont transparentes, se sont vidées?

merci!

[invite2335dc2a]

aussi (je peut plus éditer!!!!) pourquoi certaines cellules sont "grosses" et transparentes et d'autres "petites" et opaques? merci!