Salut à tous!
Je bosse en ce moment sur la mise en apoptose de cellules cancéreuses et il va nous falloir faire face à un petit problème technique!
Je vous explique!
J'induis l'apoptose dans mes cellules (qui sont pour l'instant des NG108.15 neuroblastome) et le but est de pouvoir "patcher" ces cellules anviron 4 à 6 heures après l'induction afin de pouvoir enregistrer les courants chlorures pendant le processus apoptotique....Jusque là, pas de gros problème!
Mais, il va nous falloir visualiser quelles cellules sont en apoptose et quelles cellules ne le sont pas (nécrose,...)! Cette visualisation ne poserait pas de problèmeparticulier si on se foutait du sort des cellules après la visualisation, mais le problème (j'y arrive enfin), c'est que l'on doit maintenir nos cellules vivantes pour pouvoir les patcher (Patch-clamp)!
Or, toutes les techniques de visualisation par fluorescence (que nous aurions aimé utilisé) necessitent de perméabiliser la membrane (pour faire rentrer le fluorochrome) ou de fixer les cellules! Donc dans les 2 cas on tue la cellule! J'aurais voulu utiliser des techniques classiques comme le DAPI, le TUNEL ou le iodure de propydium couplé à l'acridine orange, mais je pense qu'il faut perméabiliser pour ces 3 techniques! Sinon il y a bien un substrat fluorescent de caspase, mais il faut certainement perméabiliser aussi! On a aussi pensé à l'Anexine 5 mais il me semble que ça ne va pas faire la distinction entre les cellules nécrotiques et les cellules apoptotiques (puisqu'il y a du FLIP-FLOP des phosphatidyl serine, dans les 2 cas = la membrane est fragilisée dans les 2 cas!)
Donc je pense que vous voyez mieux mon problème..........![]()
Si vous avez des idées, n'hésitez pas!
A+ et merci d'avance pour les réponses éventuelles!
Vinc
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