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Bactéries



  1. #1
    christelle123

    Exclamation Bactéries


    ------

    bonjour,
    Pour faire le dénombrement de bactéries,on fait différentes dilutions de rapport 10 et ensuite on met cultiver ces solutions dans des boites de Pétri.Plus la dilution augmente, moins on aura de colonies sur la boite.
    si X : nombre de colonies
    dans le tube on a 10X/mL
    nombre de bactéries dans le produit = (10X x 10^(n+1))/P par gramme de produit.

    Quelqu'un pourrait m'expliquer ce paragraphe de mon cours?
    merci.

    -----

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  3. #2
    piwi

    Re : Bactéries

    Ça va être difficile de vous aider vu que l'on ne sait que ce que sont n et P.
    Je sers la science et c'est ma joie.... Il parait.

  4. #3
    christelle123

    Re : Bactéries

    désolé!
    j'étais un peu "en stress" là semaine dernière car j'avais un truc à rendre...
    j'ai à peu près compris maintenant!
    merci quand même...

  5. #4
    Biologiste16

    Re : Bactéries

    Christelle, ne nous laisse pas comme ça, moi aussi j'arrive pas à comprendre cette methode de calcul du nombre de cellules dans une cultur pûre(1seul type de colonie)?
    Mon cours est comme le tiens, on a pris 10tubes à essai pour faire une dillution à 10-5 !!! et puis on a pris 0.1 mL de la solution diluée pour l'ettaler sur des boites de Petri;

    N= nombre de colonnie dans 0.1mL et on est arrivé à cela:

    N x 1/10-5 x 0.1 x 10

    C'est le cas pour vous Christelle? prière, si tu reviens repond moi.

  6. #5
    christelle123

    Re : Bactéries

    Méthodes de dénombrement bactérien : Tout va être basé sur des méthodes de dilution car on ne peut pas compter les bactéries sur un champ s’il y en a 1 milliard par exemple. Il faut diluer pour avoir quelques bactéries par champ. C’est la même chose sur une boîte de Pétri, si on a plus de 1000 colonies, on ne peut plus compter car on a une nappe de bactéries, de colonies qui sont confluentes. Donc, à partir d’une matière première, on va prendre une certaine quantité et on va diluer, en général, au dixième (soit 1g dans 10mL, soit 1mL dans 10mL), puis on va faire des dilutions successives de rapport 10.

    On a fait les dilutions, maintenant il faut lire. On va faire un dénombrement en milieu solide (gélosé).
    Ensuite on les incube à une certaine température qui dépend de la bactérie que l’on cherche (psychrophile, mésophile, ou thermophile).

    Sur les boîtes on aura de moins en moins de colonies quand la dilution va augmenter.
    Soit X : le nombre de colonies sur la boîte
    Dans le tube -3, on a 10X /mL
    Dans -2, on en a donc 10 fois plus et dans -1, 100 fois plus.
    On a dans les tubes : 10X x 10n+1 /mL
    Dans le produit on aura : nombre de bactéries = (10X x 10n+1) / P par gramme de produit
    P = poids du produit
    On divise par P pour avoir le nombre par gramme de produit.



    C'est un plus grand extrait de mon cours, il y avait des images mais je vais les expliquer comme j'arrive pas à les mettre.
    Pour faire les dilutions, on a pris des cellules dans une boîte de Pétri et on les a dilué 10 fois, ça donne le tube -1. Ensuite à partir de ce tube, on redilue 10 fois, ça donne le -2.Et ainsi de suite.
    Ensuite on cultive.
    C'est à partir de là que je ne comprends pas trop. je vais t'expliquer comme j'ai compris : Si on a X colonies dans la boîte qui correspond au tube -3, dans le tube -3 on a 10X colonies/mL car on a pris 100µL pour faire la boîte de pétri.
    De -2 à -3, on a dilué 10 fois et de -1 à -2, 10 fois aussi.
    si on ramène ça à une formule : 10X x 10^n+1 /mL
    avec n le numéro du tube.
    ensuite on divise par P (poids du produit de départ)pour ramener en nombre/g
    je sais pas si c'est très clair?

  7. A voir en vidéo sur Futura
  8. #6
    Zellus

    Re : Bactéries

    Salut !

    Citation Envoyé par Biologiste16
    Christelle, ne nous laisse pas comme ça, moi aussi j'arrive pas à comprendre cette methode de calcul du nombre de cellules dans une cultur pûre(1seul type de colonie)?
    Mon cours est comme le tiens, on a pris 10tubes à essai pour faire une dillution à 10-5 !!! et puis on a pris 0.1 mL de la solution diluée pour l'ettaler sur des boites de Petri;

    N= nombre de colonnie dans 0.1mL et on est arrivé à cela:

    N x 1/10-5 x 0.1 x 10

    C'est le cas pour vous Christelle? prière, si tu reviens repond moi.
    Si tu veux une explication il faudrait que tu précises quel volume de culture de départ tu as et quel volume de cette culture tu as utilisé pour faire les dilutions (je suppose que c'est 0,1 mL non ?) stp. Merci !

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  10. #7
    Biologiste16

    Re : Bactéries

    D'abord merci beaucoup Christelle de t'avoir donné la peine de réecrire cette partie de ton cours, cependant ce que j'arrive pas à comprendre c'est quel est le but de diluer 10 fois?
    Zellus, je connais pas les volumes de départ!!
    bON Je resume ce qui a été explique dans mon cours ( ce que j'ai pu comprendre );

    Mesure de la croissance des bactéries à partir d'un milieu de culture pûr:

    On dispose d'une culture pûre dans un boite de petri, on est sensé faire une série de dillution, c'est avec une anse de platine qu'on prélève un echantillon de la boite et qu'on met dans un tube à essai pour effectuer la dillution à 10-5 à plusieurs reprises (qu'est-ce que ça veut dire 10-5? et quel est le but de la dillution à plusieurs fois?)
    A partir des tubes on cultive dans des boites de Petri, en utilisant une micropipette pour le transfert de 0.1 mL (100µL) de la solution diluée
    A l'aide d'un étalloir et devant le bec Bünsen (pourquoi on l'utilise?, c'est pour la stérilisation de quoi?)on étalle cette solution pour obtenir une couche de bactérie et c'est à partir de cette couche qu'on peut déterminer le nombre de bactérie!!
    On a N = nombre de colonie = 20 UFC/0.1Ml (c'est juste un exemple qui a été donnée)
    à l'aide de cette formule: N x 1/10-5 x 0.1 x 10 qu'on peut calculer le nombre de cellules que contient 1 tube
    Exemple: dans le tube n°1: 20X 1/10-5 x10= 2.107 cellules dasn un tube!!

  11. #8
    Gatchan

    Re : Bactéries

    Salut à tous,

    Citation Envoyé par Biologiste16 Voir le message
    qu'est-ce que ça veut dire 10-5? et quel est le but de la dillution à plusieurs fois?
    10-5 veut dire que tu dilues 5 fois au dixième. C'est ce qu'on appelle une dilution en cascade. Diluer à 10-5 permet de diminuer la concentration en bactéries, histoire de pouvoir les compter sur ta boîte.
    Citation Envoyé par Biologiste16 Voir le message
    pourquoi on l'utilise?, c'est pour la stérilisation de quoi?
    Le bec Bunsen crée un courant de convection à cause de la chaleur, et ça éloigne toutes les poussières qui pourraient contaminer ta boîte de culture dans un rayon d'une trentaine de cm.

  12. #9
    Zellus

    Re : Bactéries

    Citation Envoyé par Biologiste16
    qu'est-ce que ça veut dire 10-5? et quel est le but de la dillution à plusieurs fois?
    Ca veut dire que tu dilues 105 fois ta culture de départ. On fait des dilutions de 10 en 10 pour voir à partir de quelle dilution il est possible de compter les bactéries sur la boîte. Parce que si tu dilues pas assez tu auras trop de bactéries pour pouvoir les compter.
    En fait, imaginons que tu as mis les bactéries au début avec l'anse dans 10 mL de milieu de culture (que tu mélanges bien pour homogénéiser). C'est ta culture de départ dans laquelle tu dois déterminer le nombre N de bactéries.
    Tu vas en prendre 1 mL que tu vas mettre dans un autre tube contenant 9 mL de milieu de culture (sans bactéries bien sûr). Tu mélanges bien et tu obtiens ainsi ta première dilution au 1/10e. Puis tu continues à diluer ainsi de suite de 10 en 10 en prenant à chaque fois 1 mL de ta nouvelle culture que tu mets dans 9 mL de milieu.
    Pour chaque dilution, tu as pris 100 µL que tu as étalés sur une boîte de Petri, et tu laisses pousser les bactéries la nuit.
    Au passage :
    pourquoi on l'utilise?, c'est pour la stérilisation de quoi?
    Le bec Bunsen sert à éviter que tu contamines ta boîte avec d'autres bactéries ou champignons.
    Le lendemain, tu regardes tes boîtes et tu t'aperçois que celles pour lesquelles tu as peu dilué ta culture sont impossibles à utiliser pour le comptage (sauf si tu veux t'amuser à compter des milliers de bactos bien sûr ). Tu choisis donc une boîte où il est facile de compter (celle où tu as diluer 100000 fois par exemple comme dans ton cas).
    Tu comptes donc N = 20 colonies, ce qui signifie qu'il y avait 20 bactéries (vivantes en tout cas, les mortes ne pouvant pas pousser) dans les 100 µL que tu as étalés. Et il y avait donc 20*100 = 2000 bactéries dans les 10 mL du tube correspondant. Et comme ce tube correspond à une dilution au 1/100000e de ta culture de départ, tu as 100000 fois plus de bactéries dans ton premier tube, soit 2000*105 = 2.108 bactéries.
    Désolé pour le pavé. J'espère au moins que tu as compris.

  13. #10
    Biologiste16

    Re : Bactéries

    Ahhh c'est merveilleux Zellus, on peut vraiment compter sur toi pour nous aider, j'ai bien compris merci.
    tu dilues 105 fois ta culture de départ
    C'est trop non!! ça se fait ça!!

    Gatchan, j'arrive pas à comprendre ce que tu veux dire avec: "tu dilues 5 fois au dixième" ?

  14. #11
    Gatchan

    Re : Bactéries

    Ce que j'expliquais est la même chose que ce qu'a dit Zellus, mais avec des termes un peu différents.
    Tu as ta colonie que tu as mis dans ton tampon => ta culture de départ. Maintenant, tu prends 10 microL de ceci par exemple, que tu mets dans 90 microL de tampon. Tu as donc dilué au 10è et c'est ta dilution 10-1. Reprends 10 microL de cette dilution 10-1 et remets dans 90 microL de tampon. Tu as dilué ta suspension de départ 2 fois au 10è soit au 10-2. Si tu dilues 5 fois au 10è, tu as une dilution de ta solution de départ au 10-5.

    Et je t'assure que diluer 105 fois n'est pas de trop ... Si tu a quelques millions de bactéries dans ta culture de départ, il faut au moins diluer 105 fois pour avoir quelques colonies sur ta boîte (on m'a dit que le nombre devait être de 30 à 300 colonies sur une boîte pour que ce soit "acceptable").

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