Bonjour tout le monde.

J'ai un petit souci qui me pose pas mal de problèmes pour mes manips d'immunohistochimie.

Le contexte:
Matériel coupé: têtes de souris fixées pendant 24h dans du PFA 4%, cryoprotégées avec une solution de sucrose à 30% puis congelées à -80°C

Coupes: 14µm sur lames superfrost séchées à l'air puis conservées à -20°C jusqu'à utilisation.

Le problème:
Lorsque je veux utiliser mes coupes pour mes immunomarquages, je les sors du -20°C et les laisse revenir à température ambiante. Je réalise alors une post fixation avec du PFA 4% pendant 10 à 20min. Toutefois, quand j'enlève la solution de PFA pour faire un rinçage avec du PBS, toutes mes coupes partent de la lame et je ne peux pas réaliser mes traitements suivant (saturation, marquages avec Ac primaire puis secondaire, DAPI et montage)

Les questions que je me pose??

-Avez-vous déjà eu ce problème?
-Est ce que je dois changer de méthode de post fixation? Acétone pendant 2 min par exemple? ou un autre fixateur?
-Cette étape de post-fixation est-elle vraiment nécessaire?

Merci par avance pour vos réponses.