Purification de l'alpĥa-lactalbumine

[invite4af37643]

Bonjour!

J'ai eu à purifier de l'alpha-lactalbumine à partir de lait écrémé. En gros, j'ai éliminer les caséines par précipitation à pH= 4,60, puis la bêta-galactoglobuline par chromatographie d'affinité. Ensuite, j'ai fait un gel d'électrophorèse pour identifier les protéines présentes à chaque étape. Puis, j'ai passé mon produit fini dans une colonne de tamis moléculaire par HPLC. Je vois très bien mon pic d'alpha-lactalbumine à 8,504 minutes, mais j'ai un deuxième pic, à 14,804 minutes. Ce n'est pas protéique, puisqu'il n'apparaît pas sur le gel. Il fait un peu de peak tailling aussi... Tous mes compères sans exception ont le même pic. Ce peut-il que ce soit l'éluant, ou simplement l'eau?
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[inviteb3a6feac]

Bonjour.

Simple idée, est-il possible que votre purif ait été mal réalisée et que l'indice de purif soit donc bas? Ou alors avez vous peut-etre encore des protéines non identifiées qui n'ont pas été séparées lors de votre élution ?

[invite4af37643]

Oui c'est possible. Je crois même que la vitamine D s'est lié au Ca de l'alpha-lactalbumine, et que c'est elle qui apparaît en deuxième. C'est une simple hypothèse pour l'instant...