Bonjour à tous,
je planche sur de la quantification d'HSP 70 et il est écrit dans une publi que cela serait possible via la technique de cytométrie en flux. J'ai du mal à comprendre comment cela est possible, peut-être peut-on détecter si une cellule contient des HSP, mais de là à les quantifier??? (je n'ai jamais eu de formation en la matière)
si qqn peut éclairer ma lanterne...
Merci
les HSP sont des protéines il est donc possible de les marquer spécifiquement (diverses techniques marquage de l'arn , des protéines) avec un fluorochrome, molécule qui envoie un photon de longueur d'onde déterminée après excitation (à une certaine longueur d'onde mais différente de celle d'émisson)
tes cellules ainsi marquées passent dan un tube très fin les unes à la suite des autres ( d'ou le flux) qui est traversé par un faisceau de longueur d'onde correspondant à la longueur d'onde d'excitation de ton fluorophore. une fois excité il y a donc émisson d'un photon, qui est capté de l'autre coté du tube , les cellules qui passent sont comptées seulement si elle sont réactives tu peux donc savoir combien de cellules contiennent des HSP , tu met un autre fluorophore marquant toutes les cellules et tu passe ca dans la machine et tu obtient le nombre total de cellules, tu peut donc faire des rapports, des pourcentages etc....
tu obtien un diagramme comme suit:
|qqi.qaaaaaaaaaaaaaaaaaaq.
|qii.q.qaaaaaaaaaaaaaaaaq.qq.
|qi.qq.qqqqqqqqqqqqqqqqq.qqq .
|q.qqq.qqqqqqqqqqqqqqqq.qqqqq.
+---------------------------------------
le premier pic te donne le 'non spécifique' c'est à dire ton nombre total de cellules
Le second te donne les cellules qui ont réagi . l'aire sous les courbes te premet ( grâce à un étalonnage de la machine) de te dire combien de cellules contiennet des HSP
voili voilouuu
-désolé pour le double post j'ai eu du mal à fair ele graphe de manière claire ^^-
"le campbell est ton ami, mais un mauvais oreiller..."
Merci berzelius
mais ta réponse vient confirmer mon intuition, on peut certes quantifier la proportion relative de cellule contenant des HSP par rapport au nombre de cellules totales échantillonnées; mais on ne peut pas quantifier le nombre de HSP lui même!!!(la cytométrie porte bien son nom oufff).
Et oui je suis d'accord le campbell est un trés mauvais oreiller (mdr), tout comme le klaassen...ah les études...
merci berzelius, biz
certe on peut pas doser directement mais cette technique peut aider à préparer une purif après, en dessous de l'analyseur, une fois que les cellules sopnt passées devant le laser, les cellules sont triées en tube, ont enrichi un peu la solution en cellules possédant les HSP , cela aide considérablement...
( si tu as5 min je te conseille de regarder un peu le fonctionnement de la machine sur internet parceque si tu contuiue dans tes études tu va le voir souvent le cytofluorimetre en flux... rien que pour des analyses de séparation de cellules, etc , ca aide vachement et en plus c'est vraiment pas dur à comprendre, - a part les fluorochromes qui sont un peu plus méchants...)
derien pour l'aide ^^ et bonne continuation
"le campbell est ton ami, mais un mauvais oreiller..."
