SOS dosage de proteines

[invitef6a16ec2]

Bonjour,

j'ai extrais l'AChE de têtes d'abeilles à partir d'un tampon contenant en [final], du Triton x-100 1% w/v , NaCl [10mM], NaH2PO4 [15mM].

Mes essais enzymatiques sont terminées et j'ai conservé une fraction pour le dosage de mes protéines, mais à date, Lowry et Bradford ne fonctionne pas...données incohérentes. Et c'est pas du a des erreurs de manip. Je pense que c'est à comme du Triton x-100.

Est-ce possible, comment je peux doser alors? J'ai besoin de calculer mes activités par µg de protein et je dois présenter mes résultats bientôt... Des idées ??
Merci
-----

[Zellus]

Salut,

Oui ton triton X-100 est trop concentré. Tu devrais faire une dialyse avant ton dosage.

[invitef6a16ec2]

comment ça marche une dialyse?

Merci!!!

[invitea9a4c686]

Pour dyaliser il te faut des membranes de dyalise, souvent dans les labos il en traîne, sous forme de long tubes
Tu en découpe un morceau de 3 cm et tu clipses une extrêmité avec des clips qui serrent très très fort (teste avec de l'eau avant!)
tu mets ta solution à dyaliser et tu clipses l'autre extremité.
Résultat ta solution est enfermée dans un tube dont la surface est poreuse.
L'idée c'est d'utiliser le principe de dyalise pour chasser le triton.
Si tu plonge ton tube dans du PBS, le triton va aller du compartiment le plus concentré vers le moins concentré, et ainsi il va filer dans le pbs.
Au début ça va vite, tu changes tous les quart d'heure ton bain de pbs, et puis ensuite, le passage de triton de ta solution vers le PBS se ralenti car on est proche de l'équilibre, là tu laisses incuber toute la nuit.

Bonne chance!!

[A voir en vidéo sur Futura]

[invitea9a4c686]

dialyse et pas dyalise je fais cette erreur depuis des siècles
dsl

[invitef6a16ec2]

Merci pour l'information, je vais essayer ça!