Présence de bulles dans des puits de microplaques

[FonZ22]

Bonjour à tous.
Voilà mon problème. Je fais des PCR temps réel et il m'arrive parfois des bulles d'air qui restent dans les puits et qui donc perturbent les résultats en modifiant le trajet optique, me permettant donc d'avoir des aberrations dans mes résultats (des courbes qui se retrouvent d'un coup à zéro ou le contraire, elles passent de 0 au plateau en un cycle). Je sais qu'on peut les éliminer en les centrifugeant mais je n'ai pas ce qu'il faut et d'autres achats plus utiles à faire. J'ai aussi essayé en les aspirant ou en les cassant avec un cône mais c'est contraignant et de plus c'est un risque de modifier légèrement le volume du puits, ce que je préfère éviter plus que de raisons.
Donc j'aimerai savoir si quelqu'un avait une "technique de grand mère" pour enlever simplement ces bulles.
Merci d'avance
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[invitea9a4c686]

Salut
J'ai eu ce problème
Effectivement, en y allant avec un cône c'est chaud car tu risques surtout les contaminations
Par contre, y a un tour de main à prendre, quand tu dépose ton volume, tu laisse le cone toucher bien le fond du puit, tu enfonce complètement le piston de la pipette, tu bloque comme ça et tu remontes sans faire bouger d'une miette le piston
normalement t'as 0 bulle
Je m'étais entrainée dans des eppendorfs avant
Et pourtant je savais pipetter, mais pas aussi parfaitement que nécessite les manip de QPCR
j'espère que ça va t'aider
Mais vraiment évite les cônes et autre, ne passe rien au dessus de tes puits,
salut!

[FonZ22]

Oui merci je n'avais vraiment pas envie de passer ma vie à utiliser des cônes pour enlever des bulles
Merci je vais essayer ta technique, elle est comme je les aime, simple et facile à mettre en action.
Merci

[gorben]

Salut,

Par contre, y a un tour de main à prendre, quand tu dépose ton volume, tu laisse le cone toucher bien le fond du puit, tu enfonce complètement le piston de la pipette, tu bloque comme ça et tu remontes sans faire bouger d'une miette le piston
normalement t'as 0 bulle

Desole de dire ca (surtout le prend pas mal hein ) mais c'est la pire des methodes... Il ne faut en aucun cas enfoncer le cone au maximum ! Pour un pipetage precis, le cone doit a peine toucher ton liquide. Si tu enfonces le cone au maximum, tu vas changer ton volume, avoir un pipettage incorrect etc...

Pour eviter les bulles, il faut au maximum eviter les etapes de pipetages en preparant le plus de mix. Il faut aussi etre delicat quand tu expulses le liquide de la pipette. Generalement je fais s'entrainer mes etudiants sur une gamme de BSA et sur une balance de precision pour qu'ils apprennent a pipetter vite et bien (pas de honte, c'est comme ca que j'ai appris, et je le recommande a tout le monde )

A+

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite4bded444]

Je pense qu'il faut quand même centrifuger tes plaques avant car déjà cela permet de faire descendre tous les produits dans le fond du puit et ainsi d'homogénéiser ta plaque (extrement important dans une quanti) et aussi d'enlever tes bulles.

Personne n'a, à sa disposition, une centrifugeuse sur lequel tu pourrait mettre un rotor de plaque ?

Je pense que c'est la meilleur des solutions, je n'ai jamais de soucis en faisant comme ca.