Bonjour, je voudrait savoir quelle est la nature moléculaire des molécules d'adhésions (protéique, glucidique, autre) des cellules? En fait ce que je veux savoir c'est comment la trypsine dissocie les cellules entre elles? J'ai lu que la trypsine hydrolyse les liaisons peptidiques de la lysine et de l'arginine, ca veut donc dire que les molécules d'adhésions sont protéiques? Ou sont-elles hybrides? Sinon j'ai vaguement vu un truc avec des ions Mg2+ mais j'ai pas très bien compris.
La trypsine est une endoprotéase qui hydrolyse les liaisons peptidiques dans lesquelles un acide aminé basique (Lysine (Lys), Arginine (Arg)) engage sa fonction acide. Elle coupe en C-terminal de ces acides aminés. En d'autres mots, elle transforme les chaînes polypeptidiques en chaînes protéiques plus courtes pour permettre la digestion.
Et comme les molécules d'adhésions cellulaire sont de nature protéique (comme les intégrines) et glycoproteiques (comme les sélectines, cadhérines et les CAM), donc la trypsine peut facilement dissociés les cellules des organes embryonnaires (alors que les cellules des organes de l'adulte le sont difficilement).
Et cette digestion enzymatique est effectuer dans un milieu sans calcium, ni magnésium, supplémenté en EDTA (chélateur de ces deux ions divalents).
Voila j’espère que j’ai répondu a tes questions.
Cordialement,
Katie.
Bonjour,
En effet, la trypsine coupe les protéines adhérentes ce qui facilite le décrochement des cellules de leur support, ainsi que leur désolidarisation entre elles. On peut aussi décrocher les cellules avec de l'EDTA à 1 mM, mais le temps d'attente est plus long avant que les cellules se décrochent. L'EDTA piège le calcium nécessaire aux interactions intercellulaires beta-catenine/beta-catenine ainsi que la fixation des cadhérines à la MEC. On en trouve souvent dans les solutions de trypsine destinées à la culture cellulaire, cela permet un décrochement optimal et rapide.
Greg
Edit : croisement avec Katie mais les deux réponses sont bien complémentaires.
Ok merci beaucoup. Y'a juste un truc que j'ai pas compris, quand tu dit difficilement ca veut dire que c'est quand même possible? Paske moi en ce moment je travaille (enfin je suis stagiaire lol) sur une culture de cellules épithéliales du limbe, donc ce sont bien des cellules adultes? La trypsine agit pourtant dessus?
Oui c’est tout à fait possible pour les cellules adultes, je pense que c’est plus difficile pour les cellules adultes parce que les adhésions cellulaires sont plus solides que pour les cellules embryonnaires qui sont plus fragile.
Normalement c’est ça mais cela reste à vérifier...
Cordialement,
Katie.
OK ba merci beaucoup à vous deux.
Ze t'en priiiie, et bon courage pour la suite.
Cordialement,
Katie.
