Utilisation de la résine Chelex pour reverse crosslink de l'adn

[invite8bb0d20c]

Bonjour à tous !

Je recherche quelqu'un qui utiliserait du Chelex pour reverse crosslink des protéines sur l'adn et qui pourrait m'expliquer comment cela fonctionne....

Je l'utilise dans le cadre d'immunoprécipitation de la chromatine, j'en ajoute 100 uL à 10% sur mes échantillons immunoprécipités pour détacher les complexes protéine/anticorps/billes de l'adn. Pour cela je mets le tout à 99°C pendant 10 minutes.

Est-ce la température ou le chelex qui reverse crosslink ? Comment agit le chelex ?
Aussi, il ne faut pas de sel dans les échantillons pour cette étape... quelqu'un sait-il pourquoi ??

Merci beaucoup à quiconque pourra m'aider un petit peu.... j'ai beau chercher sur internet je ne trouve rien susceptible de m'éclairer....
-----

[gorben]

Salut,

Merci beaucoup à quiconque pourra m'aider un petit peu.... j'ai beau chercher sur internet je ne trouve rien susceptible de m'éclairer....

4eme lien sur google, tu as du chercher super longtemps...

A+

[invite8bb0d20c]

Et si j'ai cherché longtemps, avec plusieurs combinaisons de mots... détrompez-vous ! alors je suis peut être bête...

en tout cas le 4ème lien google est http://bpi.sophia.inra.fr/docs/Extraction_chelex.pdf, certes cela me dit que les billes captent les impuretés protéiques, mais comment ? quel est le rapport avec le fait que le chelex soit une résine échangeuse d'ions ? est-ce que les protéines sont détachées par la température, puis captées par le chélex ? et la question au sujet des sels reste entière....
je sais que je me pose beaucoup de questions, mais j'aime bien comprendre pourquoi j'utilise un produit et comment il fonctionne...

si vous avez une réponse...... ou peut être me suis-je trompée de lien !
bonne soirée à vous.

[gorben]

Salut,

C'est ici.

Le Chelex est un chelateur puissant. Il va chelater les ions positifs ce qui va permettre d'eviter la degradation de l'ADN lors de l'etape 99 deg C / 10min. C'est cette etape de chauffage qui va dissocier les proteines de l'ADN. Chelater les ions va aussi inhiber les DNases. Evidemment, si tu as ton IP dans un milieu avec 2M de MgCl2, il va te falloir 2 Kg de Chelex pour chelater tout ca. Pas/peu de sels dans le tampon est donc une condition importante.

A+

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite8bb0d20c]

Merci beaucoup !! ^^ je n'avais pas trouvé ce lien dans mes recherches... comme quoi taper juste "chelex" aurait suffi !
merci encore gorben !