Aggrégation des échantillons de SDS-PAGE

[invitef9229ed2]

Bonjour,

Je souhaite mettre en évidence la présence de protéines dans des échantillons de récifs carbonatées. Ce sont des protéines de biominéralisation (processus par lequel les organismes vivants produisent des minéraux pour renforcer leur tissus, ex: coquille). J'ai entre autre réalisé un test BCA qui m'a prouvé la présence de ces protéines (en faible quantité mais présentes).
J'ai ensuite réalisé des SDS-PAGE mais lorsque j'ajoute le tampon de Laemmli et le β-mercapto, des aggrégats se forment et donc, après application du courant, cela bloque la migration.
Quelqu'un saurait-il pourquoi ces aggrégats se forment et comment je pourrai les éviter??
Merci d'avance.
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[invite71f23525]

Bonjour et bienvenue sur Futura,

Quand se forment ces agrégats? Au moment où le laemmli est en contact avec l'extrait? Après avoir chauffé pour dénaturer?

Greg

[invitef9229ed2]

Les aggrégats se forment au moment du contact du tampon de Laemmli avec l'extrait et ne partent pas où peu après la chauffe.

[invite71f23525]

Quelle est la concentration protéique de ton extrait? Es-tu sûr qu'il n'y a pas de précipité dans ton tampon laemmli?

Greg

[A voir en vidéo sur Futura]

[Zellus]

Bonsoir,

Je souhaite mettre en évidence la présence de protéines dans des échantillons de récifs carbonatées. Ce sont des protéines de biominéralisation (processus par lequel les organismes vivants produisent des minéraux pour renforcer leur tissus, ex: coquille).

Je ne suis pas habitué personnellement à travailler sur ce type d'échantillon alors pourrais-tu nous en dire plus stp. Tu récoltes des coraux ou des coquillages dans la mer c'est ça ? Et après tu en fais quoi ? Tu les broies dans un tampon spécial ? Pourrais-tu décrire les différentes étapes que tu utilises avant le dépôt sur gel ou le dosage par BCA (centri, tampon ...) ? Merci ! ^^

le tampon de Laemmli et le β-mercapto

Il y a déjà du β-mercapto-éthanol dans le Laemmli normalement ...

des aggrégats se forment et donc, après application du courant, cela bloque la migration.

Des agrégats c'est-à-dire ? C'est visqueux, dur ?

Les aggrégats se forment au moment du contact du tampon de Laemmli avec l'extrait et ne partent pas où peu après la chauffe.

Tu chauffes à quelle température et combien de temps ?

[invitef9229ed2]

Pour ne pas douter du tampon de Laemmli, je l'ai refait. Donc je ne pense pas que ça vienne de cela.
Ma concentration protéique est de 32,83µg/ml.