Bonjour
aprés extraction des protéines. je n'arrive ppas à obtenir des bandes sur mon gel polyacrilamides. même si je précipite mes protéines avec l'acétone. il faut noter qu'il y à smire (trajectoir) sur mon gel. est ce que quelqu'un peut m'aider
merci
Bonjour,
Alors, peux tu nous préciser un peu ton protocol ?
Comment tu extrais tes protéines ? (A partir de cellules sur boites, avec un kit, avec un tampon (genre RIPA)).
Dose tu tes protéines (Bradford, BCA) pour être sur que tu récupères bien des protéines ?
Pourquoi précipites-tu tes protéines ? (Pas assez concentrée ?)
Combien de protéines déposes-tu sur gel ?
Quel type de gel ? (acrylamide 10% ?)
Le smir tu l'observes en bleu de coomassie, argent ?
Tes marqueurs protéiques migrent t'il bien ?
Après ces réponses, je suis sûr qu'on pourra y voir plus clair.
A bientôt.
FX
Bonjour
Pour l'extraction j'ai utlilisé poudre délipidé du matériel végétale
et pour les différents fractions protéiques j'ai utilisé quatre tampons
eau pour les globulines, tris/HCl pour albumine, alcool 75% pour prolamine et acide acétique 2N pour les glutéilines
Ensuite j'ai dosé avec méthode Bradford et courbe d'étallonage avec BSA
Le gel utilisé est 3% pour concentration et 12% ou 10% pour séparation
Pour le marqueur je n'est pas déposer, mais j'ai utiliser d'autre protéines d'autres collègues et qui ont montrer des bandes sur le gel
Le smir observé c'est en bleu de coomassie
Je précipite car j'ai pas trouvé de solution
Merci.
A bientôt
et tu déposes combien dans les puits?
Bonjour.
Je dépose au maximum 20ul.
Merci.
et pourquoi tu n'a pas commencer deja par une extraction des protéines totales avec le tampon phosphate
Bonjour.
Merci de m'indiquer comment je procède à l'extraction des protèines avec le tampon phosphate. Et quel est l'utilité?
Merci.
le tampon phosphate permet l'extraction des protéine totales d'une poudre vegetale, au moin tu sera sure de l'existance de votres protéines, en plus c'est un protocol trés simple
Mais j'ai utiliser methode bradford qui m'a indiquer qu'il y a présence de protèines.
en plus sur le gel il y a un smir (trajectoire de protèine).
merci
Bonsoir,
Juste pour préciser c'est "smear" et pas "smir(e)" et personnellement je traduit ça par "traînée", mais bon là n'est pas le problème ...
Tu dis donc avoir une traînée () sur ton gel. As-tu essayé de déposer moins d'échantillon par puits ? Si oui, c'est toujours pareil ?
Et quelle concentration de protéines as-tu trouvé en Bradford ?
Bonjour,
J'ai essayer de déposer différentes quantité de protéines dans les puits.
Pour la quantité que j'ai déduis à a partir du dosage Bradford c'est 35ug/ul.
Merci
salut
tu pourrais pas nous faire un scan de ton gel?
ca serait plus simple
Yoyo
Salut,
C'est beaucoup ! Je pense que tu peux déposer beaucoup moins que 20 ul sur ton gel, genre 2 ul ... Mais peut-être as-tu déjà essayé ?Pour la quantité que j'ai déduis à a partir du dosage Bradford c'est 35ug/ul
personnelement, safais bien longtemp que j'ai fais sa et je me rapel que 12ul d'extrait protéique sa ma donner une meuilleur resultat
C'est pas tellement le volume qui compte mais la quantité de protéine. Je trouve aussi que c'est trop de protéine pour avoir une belle migration.Envoyé par zigzzag
YOyo
