Question SDS-PAGE

[invite07e5d934]

Salut, je voudrais savoir pourquoi on met du Sample Buffer Reducteur dans des échantillons destinés à l'électrophorese sur gel de polyacrylamide?
-----

[invite563835f6]

il me semble que SDS signifie plutot: sodium dodécyl sulfate. mais bon, j'ai peut être faux. et selon moi, le sds permet de dénaturer les protéines, et donc de permettre de les séparer par electrophorese selon leur poids moléculaire UNIQUEMENT.
Dans le cas d'une electrophorese non dénaturante, le facteur conformation risque d'interférer sur le facteur poids moléculaire, en ceci que, la conformation peut permettre une migration +/- facile de la proteine...
En effet, en s'affranchissant de la conformation 3D de la proteine, cela te permet, en regardant les bandes de l'électrophorèse de conclure directement sur le poids moléculaire de la proteine...
autre procédés dénaturants: mercaptoethanol...

[gorben]

il me semble que SDS signifie plutot: sodium dodécyl sulfate. mais bon, j'ai peut être faux. et selon moi, le sds permet de dénaturer les protéines, et donc de permettre de les séparer par electrophorese selon leur poids moléculaire UNIQUEMENT.
Dans le cas d'une electrophorese non dénaturante, le facteur conformation risque d'interférer sur le facteur poids moléculaire, en ceci que, la conformation peut permettre une migration +/- facile de la proteine...
En effet, en s'affranchissant de la conformation 3D de la proteine, cela te permet, en regardant les bandes de l'électrophorèse de conclure directement sur le poids moléculaire de la proteine...
autre procédés dénaturants: mercaptoethanol...

Salut,

Ce n'est pas faux, mais ce n'est pas vrai non plus.
Le SDS permet de
1) denaturer les proteines
2) et c'est le role principal, il se fixe en tres grand nombre sur la proteine et il permet donc de "masquer" la charge nette de la proteine. La proteine va donc etre tres nettement negative. En appliquant une tension, les proteines vont etre entrainees par le SDS et vont migrer (l'acrylamide va ensuite les separer selon la taille).

Tu dis egalement que le Bmercaptoethanol est un procede denaturant, c'est vrai parce qu'il reduit les ponts disulfures, mais il ne peux en aucun cas etre substitue au SDS. De meme que d'autres detergeants neutres ou cationiques ne peuvent pas remplacer le SDS !

Le Sample Buffer Reducteur, est en fait un tampon qui reduit les ponts disulfures (mercaptoethanol ou DTT) pour "casser" la structure III et IV des proteines.

A+

[invite563835f6]

j'ai été un peu rapide, mais il n y avait pas d'ambiguité là dessus de mon côté..
je pense que la réponse convenait amplement à la question posée, non?

cordialement

[A voir en vidéo sur Futura]

[invitea0443c8c]

Non. Votre réponse contenait plusieurs erreurs et approximations que Gorben a parfaitement rectifié.

V.

[invite07e5d934]

Merci beaucoup!!!