bonjour,
j'ai un soucis pour amplifier une séquense riche en GC, probablement possédant une structure secondaire importante, et je n'ai jamais réussi à l'obtenir a partir d ARNm de cellule
Pourriez vous m'aider s'il vous plait?
voila quelques infos consernant ma séquense
1) la PCR à partir de vecteur fonctionne bien (j utilise une Pol spéciale GC)
2)la dénaturation de l'ARNm (5min a 95 degré) avant la RT ne me permet pas d 'observer de changement notables..
3)jai essayé des oligos différents pour la RT: random et oligo dT, sans succès non plus
j'avoue je suis un peu perdue.
Une bonne âme pourrai me donner quelques pistes de réflexion je vous prie? j en serai très reconnaissante
merci de m'avoir lue et de m'accorder un peu de votre temps
bonne soirée et merci d avance
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