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cultures cellulaires primaires



  1. #1
    biologiste22

    Thumbs up cultures cellulaires primaires

    salut,
    si quelqu'un pourra m'aider au niveau de culture cellulaires primaires!!!
    j'ai besoin de savoir l'intéret de chaque réactifs surtout pour DMSO et DMEM qu'on effectue sur cellules humaines cancéreuses pour les cultivés ( avec un schéma de protocoles de cultures ) si c'est possible !!!
    et merciiiii infiniment

    -----

    Dernière modification par LXR ; 14/01/2010 à 16h16. Motif: faute de frappe dans le titre

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  3. #2
    LXR

    Re : cultures cellulaires primaires

    Bonjour et bienvenue sur Futura Sciences,

    Si tu ne précises pas un minimum ta question, personne ne pourra te répondre. Quels réactifs utilises-tu pour faire tes cultures primaires? Car selon les types cellulaires, la composition du milieu change...
    Ensuite, "un schéma de protocole de culture", ce n'est pas assez précis. Cela dépend encore des cellules, certaines sont adhérentes d'autres surnageantes par exemple et pour chacun de ces cas le protocole sera différent.

    Greg

  4. #3
    biologiste22

    Re : cultures cellulaires primaires

    Merci bien pour ta réponse
    En fait c'est un séminaire que je prépare sur les cellules cancéreuses rénales in vitro , afin de pouvoir voir l'action de 2 médiacments inhibiteur de la rétrotranscriptase sur ces cellules tumorales ( car ils ont découvert l'expression de la rétrotranscriptase au niveau des cellules cancéreuses qui ont un effet sur la prolifération cellulaire).
    selon lemode opératoire , ils ont congelé les cellules par l'azote à -80 C° , puis ils ont utilisé du réactif DMEM avec un sérum bovin et des antibiotiques pour le milieu de culture .
    c'est pour cela j'ai demandé le rôle du DMEM avec un protocole de cultures cellulaires primaires ci c'est possible
    et Merciii

  5. #4
    fabien.che

    Re : cultures cellulaires primaires

    Le DMEM n'est pas un réactif, c'est un milieu de culture.

    Le DMSO est utilisé lors de la congélation en azote liquide pour protéger les cellules.

    Sinon, ils ont publié cette histoire de rétrotranscriptase ?

  6. #5
    biologiste22

    Re : cultures cellulaires primaires

    mercii fabien pour ton ultime réponse,
    ouii cette thérapie est publié sur investigative urology international Braz J Urol , Carmine Pittoggi et all (july_ august 2008)

  7. A voir en vidéo sur Futura
  8. #6
    fabien.che

    Re : cultures cellulaires primaires

    Il s'agit d'études préliminaires in vitro, attention aux raccourcis glissants, on n'en est pas encore arrivé à la thérapie

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  10. #7
    biologiste22

    Re : cultures cellulaires primaires

    ouiiiii , c'est une approche thérapeutique in Vitro .
    Par hasard, vous connaissez pas un protocole schématique pour la culture pimaires in Vitro des cellules humaines !!!

  11. #8
    fabien.che

    Re : cultures cellulaires primaires

    C'est à dire que oui, j'en fais tous les jours de la culture primaire de cellules humaines. Après, le protocole de culture ne varie pas par rapport à la culture de lignées.

    Ce sont juste des cultures plus fragiles et qui s'épuisent plus rapidement. Tu cherches un schéma d'un protocole de culture ou une explication schématique ?

  12. #9
    biologiste22

    Re : cultures cellulaires primaires

    a vrai dire , les 2 ci c'est possible car l'une va m'aider pour comprendre l'autre
    et merciiii

  13. #10
    fabien.che

    Re : cultures cellulaires primaires

    Pour le principe, rapidement :

    On dépose (ensemence) les cellules à une faible densité (peu de cellules / cm²) dans des boites ou des flasques de culture dans un milieu approprié (par exemple le DMEM) et éventuellement supplémenté (a.a., antibio, sérum,...).

    Les besoins varient en fonction des cellules. De plus, certaines cellules, en particulier les cultures primaires, ont parfois besoin d'un substrat pour adhérer (collagène, fibronectine, ...).

    Le milieu est renouvelé régulièrement (tous les deux jours environ).

    Quand on arrive à confluence, c'est à dire quand les cellules ont proliféré jusqu'à remplir la boite de culture, on les décolle avec de la trypsine et on les ensemence de nouveau dans plusieurs boites (en général à la même densité qu'initialement).

    Et le cycle se répète. A chaque fois que tu décolles tes cellules et les ré-ensemences, elles prennent ce qu'on appelle un passage. C'est parfois précisé dans les publis sous la forme "cellules à P2" par exemple.

    J'oubliais : tout ceci se fait sous une hotte, et muni de gants, pour se protéger et ne pas contaminer la culture !

    Pour le schéma :

    Je n'en ai pas sous la main ! Une recherche google ?
    Dernière modification par fabien.che ; 14/01/2010 à 18h18. Motif: Précision

  14. #11
    biologiste22

    Re : cultures cellulaires primaires

    mercii , pour l'explication, c'as m'as trop aidé surtt pour le mot passage !!
    j'ai effectué considérablement de recherche sur google pour en trouvé , mé pas encore un bon schéma sous les mains
    mercii encore une fois

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